| 缩略语 | 第1-7页 |
| 中文摘要 | 第7-10页 |
| Abstract | 第10-13页 |
| 第一章 前言 | 第13-30页 |
| 第一节 细胞内蛋白质的降解 | 第13-14页 |
| 第二节 泛素-蛋白酶体途径 | 第14-16页 |
| 第三节 HECT 类泛素连接酶的结构、功能及活性调控 | 第16-24页 |
| 第四节 TRAF 家族及其泛素化在免疫中的作用 | 第24-27页 |
| 第五节 蛋白质晶体结构解析 | 第27-30页 |
| 第二章 CKIP-1对泛素连接酶Smurf1的活性调控 | 第30-61页 |
| 1. 研究背景 | 第30-33页 |
| 2. 材料与方法 | 第33-35页 |
| ·质粒与试剂 | 第33页 |
| ·免疫共沉淀与Western blot | 第33-34页 |
| ·免疫荧光 | 第34页 |
| ·GST pull-down | 第34页 |
| ·体内泛素化 | 第34页 |
| ·体外泛素化 | 第34-35页 |
| 3. 结果 | 第35-53页 |
| ·CKIP-1特异增强Smurf1对自身的E3活性 | 第35-37页 |
| ·CKIP-1特异增强Smurf1对底物的E3活性 | 第37-41页 |
| ·CKIP-1与Smurf1特异相互作用 | 第41-46页 |
| ·CKIP-1靶向Smurf1的WW结构域连接区，增强其与底物结合 | 第46-53页 |
| ·生理条件下CKIP-1辅助Smurf1负调控骨形成 | 第53页 |
| 4. 小结 | 第53-54页 |
| 5. 讨论 | 第54-61页 |
| 第三章 Smurf1促进TRAF家族分子的泛素化降解 | 第61-70页 |
| 1. 研究背景 | 第61页 |
| 2. 材料与方法 | 第61-62页 |
| ·质粒与试剂 | 第61页 |
| ·酵母双杂交筛选Smurf1 相互作用蛋白 | 第61-62页 |
| ·TRAF4 蛋白水平检测 | 第62页 |
| ·TRAFs 体内泛素化 | 第62页 |
| ·NF-κB 报告基因实验 | 第62页 |
| 3. 结果 | 第62-67页 |
| ·以Smurf1 WW 区域为诱饵酵母双杂交筛选相互作用蛋白 | 第62-63页 |
| ·Smurf1 与TRAF4 相互作用 | 第63页 |
| ·Smurf1 促进TRAF4 的泛素化降解 | 第63-64页 |
| ·Smurf1 促进TRAF 家族成员的泛素化并负调控其功能 | 第64-67页 |
| ·CKIP-1 增强Smurf1 对TRAF 家族成员的泛素化降解 | 第67页 |
| 4. 小结 | 第67-68页 |
| 5. 讨论 | 第68-70页 |
| 第四章 CKIP-1的C-term1和Smurf1的 C2结构域晶体结构解析 | 第70-81页 |
| 1. 研究背景 | 第70-71页 |
| 2. 材料与方法 | 第71-72页 |
| ·质粒和菌种 | 第71页 |
| ·蛋白质纯化相关仪器耗材 | 第71页 |
| ·蛋白的试表达 | 第71-72页 |
| ·蛋白的大量表达、纯化 | 第72页 |
| ·蛋白的晶体筛选及优化 | 第72页 |
| ·C2蛋白的空间结构解析 | 第72页 |
| 3. 结果 | 第72-79页 |
| ·CKIP-1-C-term1 蛋白纯化 | 第72页 |
| ·C-term1 蛋白的晶体筛选及优化 | 第72-74页 |
| ·缺失C2 结构域后Smurf1 的自身降解减弱 | 第74-75页 |
| ·Smurf1 C2 结构域的大量表达及分子筛纯化 | 第75页 |
| ·C2 结构域的晶体筛选及优化 | 第75-76页 |
| ·Smurf1 C2 结构域的空间结构 | 第76-79页 |
| 4. 小结 | 第79页 |
| 5. 讨论 | 第79-81页 |
| 参考文献 | 第81-94页 |
| 附录 | 第94-107页 |
| 附录1 常用实验方法详细步骤 | 第94-99页 |
| 附录2 引物用途、酶切位点、名称和序列 | 第99-105页 |
| 附录3 主要仪器设备和主要试剂的配制 | 第105-107页 |
| 综述 | 第107-118页 |
| 个人简历以及在读期间发表的论文、所获奖励 | 第118-119页 |
| 致谢 | 第119页 |
