| 摘要 | 第1-5页 |
| Abstract | 第5-9页 |
| 1 绪论 | 第9-20页 |
| ·糖尿病对人类健康的影响 | 第9-12页 |
| ·糖尿病患者群 | 第9页 |
| ·糖尿病病因和分类 | 第9-12页 |
| ·胰岛素对糖尿病的治疗 | 第12-16页 |
| ·胰岛素结构和功能 | 第12-13页 |
| ·胰岛素药物的发展历程 | 第13-14页 |
| ·速效和类胰岛素 | 第14-15页 |
| ·基因工程技术表达重组人胰岛素的研究 | 第15-16页 |
| ·植物油体表达系统 | 第16-19页 |
| ·油体和油体蛋白 | 第16-17页 |
| ·油体系统的特点和发展现状 | 第17-19页 |
| ·本研究的目的和意义 | 第19-20页 |
| 2 材料与方法 | 第20-46页 |
| ·实验材料 | 第20-22页 |
| ·植物材料 | 第20页 |
| ·菌株和载体 | 第20页 |
| ·植物培养基 | 第20页 |
| ·主要生化与化学试剂 | 第20页 |
| ·主要仪器设备 | 第20-21页 |
| ·试剂盒和部分溶液配方 | 第21-22页 |
| ·实验方法 | 第22-46页 |
| ·op::og-hmins植物双元表达载体构建 | 第22-27页 |
| ·oleosin-hmins融合基因植物双元表达载体构建 | 第27-28页 |
| ·op::og-hmins转化根癌农杆菌GV3101 | 第28-29页 |
| ·花粉管通道法转化拟南芥 | 第29-30页 |
| ·转基因拟南芥DNA提取及PCR鉴定 | 第30-32页 |
| ·转基因拟南芥Southern blot杂交分析 | 第32-36页 |
| ·荧光定量PCR检测转基因拟南芥ohmins基因的表达 | 第36-40页 |
| ·靶基因Ohmins翻译水平检测 | 第40-46页 |
| 3 结果与分析 | 第46-65页 |
| ·op::og-hmins植物双元表达载体构建 | 第46-49页 |
| ·人胰岛素原基因(mins)的设计 | 第46页 |
| ·双元表达载体op::og-mins构建 | 第46-48页 |
| ·阳性克隆PCR检测和测序 | 第48-49页 |
| ·oleosin-hmins融合基因植物双元表达载体构建 | 第49-51页 |
| ·PCR突变法获得人胰岛素原基因(hmins) | 第49-50页 |
| ·双元表达载体op::og-hmins的构建 | 第50页 |
| ·阳性克隆PCR检测 | 第50-51页 |
| ·工程农杆菌GV3101的制备 | 第51页 |
| ·拟南芥的种植和农杆菌介导的遗传转化 | 第51-53页 |
| ·转基因拟南芥的PCR检测 | 第53页 |
| ·转基因拟南芥Southern杂交分析 | 第53-54页 |
| ·荧光定量PCR方法的建立 | 第54-60页 |
| ·拟南芥各组织RNA的提取 | 第54-55页 |
| ·荧光定量PCR反应曲线 | 第55-56页 |
| ·荧光定量PCR工作曲线 | 第56-57页 |
| ·溶解曲线分析 | 第57-58页 |
| ·凝胶电泳分析real-time PCR产物 | 第58页 |
| ·荧光定量PCR结果的统计分析 | 第58-60页 |
| ·转基因拟南芥外源蛋白表达检测 | 第60-65页 |
| ·ohmins基因拟南芥总油体蛋白的测定 | 第60-61页 |
| ·种子总蛋白SDS-PAGE分析 | 第61-62页 |
| ·种子总蛋白Western Blot杂交分析 | 第62页 |
| ·转基因拟南芥靶蛋白含量的ELISA检测 | 第62-65页 |
| 4 讨论与结论 | 第65-68页 |
| ·拟南芥作为表达系统的优点 | 第65页 |
| ·基因和载体的优化 | 第65-66页 |
| ·油体系统表达胰岛素原的意义 | 第66页 |
| ·结论 | 第66-67页 |
| ·后续研究工作 | 第67-68页 |
| 参考文献 | 第68-72页 |
| 附录一 溶液的配制 | 第72-74页 |
| 附录二 英文缩略词表 | 第74-75页 |
| 附录三 本实验所使用的试剂 | 第75-77页 |
| 攻读学位期间发表的学术论文 | 第77-78页 |
| 致谢 | 第78-79页 |
