| 摘要 | 第4-5页 |
| Abstract | 第5-6页 |
| 第一章 绪论 | 第12-22页 |
| 1 甲基化儿茶素及茶树CsCOMT基因研究进展 | 第12-17页 |
| 1.1 甲基化EGCG的发现及资源化学 | 第13-14页 |
| 1.2 甲基化EGCG的药理学活性 | 第14-15页 |
| 1.2.1 抗过敏 | 第14页 |
| 1.2.2 抗氧化 | 第14页 |
| 1.2.3 抗肥胖 | 第14页 |
| 1.2.4 其他活性 | 第14-15页 |
| 1.3 甲基化EGCG的分析及分离纯化方法 | 第15-16页 |
| 1.3.1 甲基化EGCG的分析方法研究 | 第15页 |
| 1.3.2 甲基化EGCG的分离纯化方法研究 | 第15-16页 |
| 1.3.2.1 LH-20凝胶柱 | 第15页 |
| 1.3.2.2 大孔吸附树脂 | 第15-16页 |
| 1.3.2.3 高速逆流色谱 | 第16页 |
| 1.3.2.4 制备型液相色谱 | 第16页 |
| 1.4 茶树中CsCOMT基因研究进展 | 第16-17页 |
| 2 启动子克隆方法研究进展 | 第17-20页 |
| 2.1 利用基因组文库筛选克隆启动子 | 第17页 |
| 2.2 利用启动子探针质粒载体筛选启动子 | 第17-18页 |
| 2.3 利用PCR方法克隆启动子 | 第18-20页 |
| 2.3.1 常规pcr方法克隆启动子 | 第18页 |
| 2.3.2 反向PCR法 | 第18页 |
| 2.3.3 锅饼PCR法 | 第18-19页 |
| 2.3.4 序列特异性引物PCR法 | 第19页 |
| 2.3.5 接头PCR法 | 第19页 |
| 2.3.6 热不对称交错式PCR法 | 第19-20页 |
| 2.3.7 Y型接头PCR法 | 第20页 |
| 2.3.8 其他PCR方法 | 第20页 |
| 3 本研究的目的与意义 | 第20-22页 |
| 第二章 茶树CsCOMT基因启动子克隆 | 第22-34页 |
| 1 实验材料、试剂和方法 | 第22-27页 |
| 1.1 实验材料 | 第22页 |
| 1.2 实验仪器 | 第22页 |
| 1.3 实验方法 | 第22-27页 |
| 1.2.1 DNA提取 | 第22-23页 |
| 1.2.2 DNA酶切 | 第23页 |
| 1.2.3 DNA酶切产物纯化 | 第23页 |
| 1.2.4 接头连接 | 第23-24页 |
| 1.2.5 引物设计及步移扩增 | 第24-25页 |
| 1.2.6 PCR产物切胶回收 | 第25页 |
| 1.2.7 载体连接与转化感受态cell | 第25-26页 |
| 1.2.8 重组子筛选及菌落扩大培养 | 第26页 |
| 1.2.9 测序及生物信息学分析 | 第26-27页 |
| 2 实验结果 | 第27-34页 |
| 2.1 茶叶DNA的提取 | 第27页 |
| 2.2 茶鲜叶DNA酶切 | 第27-28页 |
| 2.3 启动子克隆 | 第28-29页 |
| 2.4 测序结果PCR验证 | 第29页 |
| 2.5 启动子序列及生物信息学分析 | 第29-34页 |
| 2.5.1 转录起点及核心启动子预测 | 第31页 |
| 2.5.2 启动子GC含量分析 | 第31页 |
| 2.5.3 启动子顺式作用元件分析 | 第31-34页 |
| 第三章 茶树CsCOMT基因的表达差异规律 | 第34-41页 |
| 1 材料和方法 | 第34-36页 |
| 1.1 材料、试剂 | 第34页 |
| 1.2 实验仪器 | 第34页 |
| 1.3 实验方法 | 第34-36页 |
| 1.3.0 茶叶采摘标准 | 第34页 |
| 1.3.1 儿茶素提取 | 第34页 |
| 1.3.2 高效液相色谱条件 | 第34-35页 |
| 1.3.3 茶叶总RNA的提取与纯化 | 第35页 |
| 1.3.4 RNA逆转录 | 第35-36页 |
| 1.3.5 荧光定量pcr检测 | 第36页 |
| 2 实验结果 | 第36-40页 |
| 2.1 EGCG”3Me含量变化规律 | 第36-38页 |
| 2.1.1 EGCG”3Me含量在不同品种中变化规律 | 第36-37页 |
| 2.1.2 EGCG”3Me含量随季节变化规律 | 第37-38页 |
| 2.1.3 EGCG”3Me含量随叶片成熟度变化规律 | 第38页 |
| 2.2 茶树CsCOMT基因表达变化规律 | 第38-40页 |
| 2.2.1 CsCOMT基因相对表达水平随季节变化规律 | 第38-39页 |
| 2.2.2 CsCOMT基因相对表达水平随叶片成熟度变化规律 | 第39-40页 |
| 3 小结与讨论 | 第40-41页 |
| 第四章 甲基化EGCG薄层色谱分析方法的建立 | 第41-52页 |
| 1 实验材料和方法 | 第41-42页 |
| 1.1 实验材料、试剂与仪器 | 第41页 |
| 1.2 实验方法 | 第41-42页 |
| 1.2.1 儿茶素提取 | 第41页 |
| 1.2.2 试剂配制 | 第41页 |
| 1.2.3 点样、展开、扫描与显色 | 第41-42页 |
| 2 实验结果 | 第42-50页 |
| 2.1 不同展开剂一次展开效果 | 第42-45页 |
| 2.1.1 正丁醇-丙酮-乙酸(5:5:3) | 第42-43页 |
| 2.1.2 甲醇 | 第43页 |
| 2.1.3 甲醇-乙酸(2:1) | 第43-44页 |
| 2.1.4 丙酮-乙酸(2:1) | 第44-45页 |
| 2.1.5 甲醇-丙酮-乙酸(8:5:3) | 第45页 |
| 2.2 二次展开对展开结果的影响 | 第45-49页 |
| 2.2.1 正丁醇-丙酮-乙酸(5:5:3)二次展开 | 第45-46页 |
| 2.2.2 甲醇二次展开 | 第46-47页 |
| 2.2.3 甲醇-乙酸(2:1)二次展开 | 第47页 |
| 2.2.4 甲醇与甲醇-乙酸(2:1)二次展开 | 第47-48页 |
| 2.2.5 甲醇与丙酮-乙酸(2:1)二次展开 | 第48-49页 |
| 2.3 验证试验 | 第49-50页 |
| 3 小结与讨论 | 第50-52页 |
| 第五章 总结与展望 | 第52-53页 |
| 1、总结 | 第52页 |
| 2、展望 | 第52-53页 |
| 参考文献 | 第53-60页 |
| 致谢 | 第60-61页 |
| 作者简介 | 第61页 |
