| 摘要 | 第1-12页 |
| Abstract | 第12-13页 |
| 第一章 文献综述 | 第13-31页 |
| 1. 圆环病毒研究进展 | 第13-19页 |
| ·圆环病毒的发现及其分类 | 第13-14页 |
| ·圆环病毒病原特征 | 第14-15页 |
| ·圆环病毒的分子生物学研究进展 | 第15-16页 |
| ·圆环病毒的致病性及致病机理 | 第16-18页 |
| ·圆环病毒的检测方法 | 第18-19页 |
| 2. 圆环病毒感染相关的疾病及疫苗研究进展 | 第19-25页 |
| ·PCV2与PMWS | 第19-21页 |
| ·CAV与鸡传染性贫血病 | 第21-22页 |
| ·BFDV与鹦鹉喙羽病 | 第22页 |
| ·PiCV与鸽圆环病毒病 | 第22-23页 |
| ·TTV与人的肝炎 | 第23-24页 |
| ·圆环病毒疫苗的研究进展 | 第24-25页 |
| 3. 鹅圆环病毒及其致病性研究进展 | 第25-27页 |
| 4. 禽类其他免疫抑制病原 | 第27-31页 |
| ·传染性法氏囊病病毒(IBDV) | 第28页 |
| ·马立克氏病病毒(MDV) | 第28-29页 |
| ·网状内皮增生病病毒(REV) | 第29页 |
| ·鸡白血病病毒(ALV) | 第29-30页 |
| ·免疫抑制性病毒的二重或多重感染 | 第30-31页 |
| 第二章 鹅圆环病毒全基因组的克隆 | 第31-38页 |
| 1. 材料 | 第31-32页 |
| ·质粒与菌株 | 第31页 |
| ·生化和分子生物学试剂 | 第31-32页 |
| 2. 方法 | 第32-35页 |
| ·pMDT-GoCV-yk01质粒DNA的提取 | 第32页 |
| ·含BamH Ⅰ酶切位点的全长基因组扩增 | 第32-34页 |
| ·目的片段的回收与克隆 | 第34-35页 |
| 3. 结果 | 第35-37页 |
| ·GoCV全长基因组DNA的扩增 | 第35-36页 |
| ·阳性克隆pGEMT-GoCV-Bam的鉴定 | 第36-37页 |
| 4. 讨论 | 第37-38页 |
| 第三章 鹅圆环病毒感染性克隆的构建 | 第38-45页 |
| 1. 材料 | 第38页 |
| ·质粒与菌株 | 第38页 |
| ·生化和分子生物学试剂 | 第38页 |
| 2. 方法 | 第38-41页 |
| ·pGEMT-GoCV-Bam质粒的试剂盒抽提 | 第38-39页 |
| ·GoCV全长基因组DNA的回收 | 第39页 |
| ·连接反应 | 第39页 |
| ·连接产物的PCR扩增 | 第39-40页 |
| ·GoCV全长基因组二聚体DNA片段的割胶回收 | 第40页 |
| ·GoCV基因组二聚体DNA的二次PCR与割胶回收 | 第40页 |
| ·GoCV二聚体的克隆及正向串联克隆子的筛选 | 第40-41页 |
| 3. 结果 | 第41-43页 |
| ·PCR扩增结果 | 第41-42页 |
| ·克隆子的PCR筛选 | 第42页 |
| ·克隆子的酶切鉴定 | 第42-43页 |
| ·GoCV正向串联二聚体感染性克隆的测序确认 | 第43页 |
| 4 讨论 | 第43-45页 |
| 第四章 感染性克隆的人工转染实验 | 第45-51页 |
| 1. 材料 | 第45页 |
| ·质粒与菌株 | 第45页 |
| ·生化和分子生物学试剂 | 第45页 |
| 2. 方法 | 第45-47页 |
| ·感染性克隆质粒的大量抽提 | 第45-46页 |
| ·抽提质粒的EcoRⅠ酶切 | 第46页 |
| ·酶切产物纯化与浓缩 | 第46页 |
| ·胚及雏鹅转染试验与采样 | 第46-47页 |
| ·采集样品的PCR检测 | 第47页 |
| ·阳性PCR产物中标记位点的Bam Ⅰ酶切鉴定 | 第47页 |
| 3. 结果 | 第47-49页 |
| ·血清和组织中GoCV DNA的PCR检测 | 第47-49页 |
| ·PCR产物的BamH Ⅰ酶切鉴定 | 第49页 |
| 4. 讨论 | 第49-51页 |
| 第五章 实时荧光定量PCR方法的建立及对转染动物的检测 | 第51-57页 |
| 1. 材料 | 第51页 |
| ·质粒和菌株 | 第51页 |
| ·主要试剂 | 第51页 |
| 2. 方法 | 第51-52页 |
| ·引物的设计与合成 | 第51-52页 |
| ·标准模板的制备 | 第52页 |
| ·实时荧光定量PCR反应体系的建立及优化 | 第52页 |
| ·荧光定量PCR反应标准曲线的建立及灵敏度分析 | 第52页 |
| ·重复性试验 | 第52页 |
| ·转染试验样本中GoCV DNA的定量检测 | 第52页 |
| 3. 结果 | 第52-55页 |
| ·荧光定量PCR反应条件的确定 | 第53页 |
| ·标准曲线的建立与溶解曲线分析 | 第53-54页 |
| ·灵敏度试验 | 第54-55页 |
| ·重复性试验 | 第55页 |
| ·转染样品中GoCV DNA的定量检测 | 第55页 |
| 4. 讨论 | 第55-57页 |
| 本研究的创新点及后续研究 | 第57-58页 |
| 参考文献 | 第58-67页 |
| 附录一 GoCV全长基因组正向串联二聚体感染性克隆的序列 | 第67-70页 |
| 附录二 GoCV全长基因组二聚体可能的连接方式及其酶切分析预测 | 第70-71页 |
| 附录三 攻读硕士期间参与的课题与发表的论文 | 第71-72页 |
| 致谢 | 第72页 |
