| 摘要 | 第3-5页 |
| ABSTRACT | 第5-7页 |
| 第一章 引言 | 第11-20页 |
| 1.1 花鲈致病菌及鱼类抗菌机制 | 第11-15页 |
| 1.1.1 花鲈及其致病菌 | 第11-12页 |
| 1.1.2 鱼类抗菌机制 | 第12-13页 |
| 1.1.3 TLR信号通路研究概况 | 第13-15页 |
| 1.2TLR信号通路的关键因子TRAF6及IRAK4 | 第15-18页 |
| 1.2.1 TRAF6结构与功能 | 第15-17页 |
| 1.2.2 IRAK4结构与功能 | 第17-18页 |
| 1.2.3 鱼类中TRAF6与IRAK4基因研究进展 | 第18页 |
| 1.3 该研究的目的和意义 | 第18-20页 |
| 第二章 LmTRAF6和LmIRAK4基因的克隆与序列分析 | 第20-39页 |
| 2.1 实验材料 | 第20-22页 |
| 2.1.1 实验用鱼 | 第20页 |
| 2.1.2 实验器材 | 第20-21页 |
| 2.1.3 试剂与溶液配制 | 第21-22页 |
| 2.2 实验方法 | 第22-29页 |
| 2.2.1 获取花鲈组织 | 第22页 |
| 2.2.2 抽提花鲈总RNA并测其纯度 | 第22-23页 |
| 2.2.3 cDNA第一条链的合成 | 第23-24页 |
| 2.2.4 3'RACE模板合成 | 第24页 |
| 2.2.5 LmTRAF6和LmIRAK4基因全长克隆 | 第24-27页 |
| 2.2.6 LmTRAF6和LmIRAK4基因3'末端扩增 | 第27-29页 |
| 2.2.7 LmTRAF6和LmIRAK4基因序列的生信分析 | 第29页 |
| 2.3 实验结果 | 第29-37页 |
| 2.3.1 LmTRAF6的cDNA序列特征 | 第29-33页 |
| 2.3.2 LmIRAK4的cDNA序列特征 | 第33-37页 |
| 2.4 讨论 | 第37-39页 |
| 第三章 LmTRAF6和LmIRAK4的亚细胞定位 | 第39-49页 |
| 3.1 实验材料 | 第39-41页 |
| 3.1.1 实验细胞与载体 | 第39页 |
| 3.1.2 实验器材 | 第39-40页 |
| 3.1.3 实验试剂与配制 | 第40-41页 |
| 3.2 实验方法 | 第41-47页 |
| 3.2.1 载体构建 | 第41-43页 |
| 3.2.2 重组载体质粒抽提 | 第43-44页 |
| 3.2.3 HEK-293T细胞培养 | 第44-45页 |
| 3.2.4 细胞转染与定位 | 第45-47页 |
| 3.3 实验结果 | 第47-48页 |
| 3.4 讨论 | 第48-49页 |
| 第四章 LmTRAF6及LmIRAK4表达模式分析 | 第49-61页 |
| 4.1 实验材料 | 第49-50页 |
| 4.1.1 实验动物 | 第49页 |
| 4.1.2 实验试剂 | 第49-50页 |
| 4.2 实验方法 | 第50-53页 |
| 4.2.1 LmTRAF6及LmIRAK4在各组织定量分析 | 第50-51页 |
| 4.2.2 菌刺激后LmTRAF6及LmIRAK4定量分析 | 第51-53页 |
| 4.3 实验结果 | 第53-58页 |
| 4.3.1 LmTRAF6及LmIRAK4的组织差异表达 | 第53-54页 |
| 4.3.2 LmTRAF6在细菌刺激下的表达分析 | 第54-56页 |
| 4.3.3 LmIRAK4在细菌刺激下的表达分析 | 第56-58页 |
| 4.4 讨论 | 第58-61页 |
| 第五章 过表达LmTRAF6活化NF-κB并协助细胞抵抗菌应激 | 第61-74页 |
| 5.1 实验材料 | 第61-62页 |
| 5.2 实验方法 | 第62-68页 |
| 5.2.1 不同浓度菌刺激下的HEK293T凋亡率探究 | 第62页 |
| 5.2.2 菌刺激下过表达LmTRAF6的细胞凋亡率检测 | 第62-63页 |
| 5.2.3 LmTRAF6对NF-κB活化效果测定 | 第63-64页 |
| 5.2.4 菌刺激下过表达LmTRAF6对NF-κB因子的活化分析 | 第64-65页 |
| 5.2.5 LmTRAF6功能域缺失影响NF-κB因子的活化分析 | 第65-68页 |
| 5.3 实验结果 | 第68-72页 |
| 5.3.1 菌刺激下过表达LmTRAF6的细胞凋亡率 | 第68-70页 |
| 5.3.2 菌刺激下过表达LmTRAF6对NF-κB因子的活化 | 第70-71页 |
| 5.3.3 LmTRAF6功能域缺失影响NF-κB因子的活化 | 第71-72页 |
| 5.4 讨论 | 第72-74页 |
| 第六章 基于花鲈头肾原代培养细胞的基因沉默与过表达 | 第74-79页 |
| 6.1 实验材料 | 第74页 |
| 6.2 实验方法 | 第74-76页 |
| 6.2.1 花鲈头肾原代细胞培养 | 第74-75页 |
| 6.2.2 过表达LmTRAF6 | 第75-76页 |
| 6.2.3 siRNA干扰 | 第76页 |
| 6.3 实验结果 | 第76-78页 |
| 6.4 讨论 | 第78-79页 |
| 结论 | 第79-80页 |
| 参考文献 | 第80-92页 |
| 附录 | 第92-93页 |
| 致谢 | 第93页 |
