| 致谢 | 第4-8页 |
| 摘要 | 第8-9页 |
| 英文缩略词表 | 第9-10页 |
| 1.文献综述 | 第10-20页 |
| 1.1 防御素的研究进展 | 第10-12页 |
| 1.1.1 防御素的分类及分布 | 第10页 |
| 1.1.2 防御素的生物活性 | 第10-11页 |
| 1.1.3 防御素的作用机制 | 第11页 |
| 1.1.4 猪β-防御素 | 第11-12页 |
| 1.2 防御素的分子改造 | 第12页 |
| 1.3 定点突变技术 | 第12-13页 |
| 1.3.1 寡核苷酸引物定点突变 | 第12-13页 |
| 1.3.2 盒式突变 | 第13页 |
| 1.3.3 PCR定点突变 | 第13页 |
| 1.3.4 定点突变的应用 | 第13页 |
| 1.4 定向进化 | 第13-20页 |
| 1.4.1 易错PCR | 第13-14页 |
| 1.4.2 外显子改组(exon shuffling) | 第14-15页 |
| 1.4.3 DNA改组技术(DNA shuffling) | 第15-20页 |
| 1.4.3.1 DNA改组的发展 | 第16-18页 |
| 1.4.3.2 DNA改组的应用前景 | 第18-20页 |
| 2.引言 | 第20-21页 |
| 3.猪β防御素2的定点突变及其活性分析 | 第21-40页 |
| 3.1 实验材料 | 第21-23页 |
| 3.1.1 质粒、菌株 | 第21页 |
| 3.1.2 酶和主要试剂 | 第21页 |
| 3.1.3 主要试剂及配制 | 第21-23页 |
| 3.1.4 主要仪器与设备 | 第23页 |
| 3.2 实验方法 | 第23-29页 |
| 3.2.1 pBD-2的定点突变 | 第23-25页 |
| 3.2.1.1 定点突变位点设计 | 第23-24页 |
| 3.2.1.2 定点突变引物设计与合成 | 第24页 |
| 3.2.1.3 PCR扩增 | 第24-25页 |
| 3.2.2 克隆载体的构建 | 第25-26页 |
| 3.2.3 理化性质预测及同源建模 | 第26页 |
| 3.2.4 表达载体的构建 | 第26页 |
| 3.2.4.1 重组质粒的双酶切 | 第26页 |
| 3.2.4.2 重组pBD-2基因与表达载体连接及鉴定 | 第26页 |
| 3.2.5 重组pBD-2的诱导与纯化鉴定 | 第26-28页 |
| 3.2.5.1 重组pBD-2的诱导表达 | 第26-27页 |
| 3.2.5.2 重组蛋白的提取纯化 | 第27页 |
| 3.2.5.3 蛋白浓度测定 | 第27页 |
| 3.2.5.4 SDS-PAGE分析 | 第27-28页 |
| 3.2.6 重组蛋白活性分析 | 第28-29页 |
| 3.2.6.1 抑菌活性分析 | 第28页 |
| 3.2.6.2 溶血活性分析 | 第28-29页 |
| 3.2.6.3 盐浓度敏感性检测 | 第29页 |
| 3.3 结果与分析 | 第29-38页 |
| 3.3.1 理化性质预测 | 第29-30页 |
| 3.3.2 同源建模 | 第30-31页 |
| 3.3.3 PCR扩增结果 | 第31页 |
| 3.3.4 重组质粒的克隆检测 | 第31-33页 |
| 3.3.4.1 菌液PCR鉴定 | 第32页 |
| 3.3.4.2 测序鉴定 | 第32-33页 |
| 3.3.5 表达载体的构建 | 第33页 |
| 3.3.5.1 重组质粒双酶切鉴定 | 第33页 |
| 3.3.5.2 PET30a-mpBD2-DD1~DD6的测序鉴定 | 第33页 |
| 3.3.6 重组目的蛋白诱导表达与纯化鉴定 | 第33-34页 |
| 3.3.6.1 重组蛋白诱导表达的SDS-PAGE分析 | 第33-34页 |
| 3.3.6.2 重组纯化蛋白的SDS-PAGE分析 | 第34页 |
| 3.3.7 蛋白活性分析 | 第34-38页 |
| 3.3.7.1 抑菌活性分析 | 第34-37页 |
| 3.3.7.2 溶血活性分析 | 第37页 |
| 3.3.7.3 盐浓度敏感性分析 | 第37-38页 |
| 3.4 讨论与结论 | 第38-40页 |
| 3.4.1 讨论 | 第38-39页 |
| 3.4.2 结论 | 第39-40页 |
| 4.猪β防御素2的DNA改组及其活性分析 | 第40-54页 |
| 4.1 实验材料 | 第40页 |
| 4.2 实验方法 | 第40-42页 |
| 4.2.1 DNA改组 | 第40-42页 |
| 4.2.2 克隆载体的构建 | 第42页 |
| 4.2.3 理化性质的预测及同源建模 | 第42页 |
| 4.2.4 表达载体的构建 | 第42页 |
| 4.2.5 重组pBD-2的诱导与纯化鉴定 | 第42页 |
| 4.2.6 重组蛋白活性分析 | 第42页 |
| 4.3 结果与分析 | 第42-52页 |
| 4.3.1 DNA改组 | 第42-43页 |
| 4.3.2 重组质粒的克隆及检测 | 第43-45页 |
| 4.3.2.1 重组质粒的菌液PCR检测 | 第43-44页 |
| 4.3.2.2 重组质粒的测序鉴定 | 第44-45页 |
| 4.3.3 理化性质预测 | 第45页 |
| 4.3.4 同源建模 | 第45-47页 |
| 4.3.5 表达载体的构建 | 第47页 |
| 4.3.6 目的蛋白诱导表达与纯化鉴定 | 第47-49页 |
| 4.3.6.1 重组蛋白的SDS-PAGE分析 | 第47-48页 |
| 4.3.6.2 重组纯化蛋白的SDS-PAGE分析 | 第48-49页 |
| 4.3.7 蛋白活性分析 | 第49-52页 |
| 4.3.7.1 抑菌活性分析 | 第49-51页 |
| 4.3.7.2 溶血活性分析 | 第51页 |
| 4.3.7.3 盐浓度敏感性分析 | 第51-52页 |
| 4.4 讨论与结论 | 第52-54页 |
| 4.4.1 讨论 | 第52-53页 |
| 4.4.2 结论 | 第53-54页 |
| 5.全文总结 | 第54-55页 |
| 参考文献 | 第55-62页 |
| 英文摘要 | 第62-63页 |
