| 摘要 | 第3-6页 |
| Abstract | 第6-8页 |
| 英文缩写词表 | 第12-14页 |
| 第1章 引言 | 第14-26页 |
| 1.1 PGRN分子的概述 | 第14-18页 |
| 1.1.1 PGRN蛋白质结构、基因定位以及分布 | 第14-15页 |
| 1.1.2 PGRN的生物学功能 | 第15-18页 |
| 1.2 LIV-1分子的概述 | 第18-23页 |
| 1.2.1 LIV-1的发现,结构,家族成员及其分布 | 第18-20页 |
| 1.2.2 LIV-1的生物学功能 | 第20-23页 |
| 1.3 课题研究意义 | 第23-24页 |
| 1.4 课题技术路线 | 第24-26页 |
| 1.4.1 酵母双杂交系统筛选与PGRN相互作用的分子 | 第24页 |
| 1.4.2 PGRN与hLIV-1相互作用的鉴定 | 第24-25页 |
| 1.4.3 hLIV-1在PGRN介导的肝癌细胞侵袭过程中的功能初探 | 第25-26页 |
| 第2章 酵母双杂交系统筛选与PGRN相互作用的分子 | 第26-48页 |
| 2.1 实验材料和仪器 | 第27-32页 |
| 2.1.1 质粒和菌株 | 第27页 |
| 2.1.2 主要试剂 | 第27-28页 |
| 2.1.3 主要试剂的配制 | 第28-32页 |
| 2.1.4 主要仪器设备及材料 | 第32页 |
| 2.2 实验方法 | 第32-40页 |
| 2.2.1 PGRN(no signal peptide)在酵母菌AH109中的蛋白表达检测 | 第32-35页 |
| 2.2.2 Matchmaker GAL4 cDNA文库质粒大量制备及插入片段的多样性检测 | 第35-37页 |
| 2.2.3 酵母双杂交筛选可能与PGRN相互作用的分子 | 第37-40页 |
| 2.3 实验结果 | 第40-44页 |
| 2.3.1 PGRN(no signal peptide)在酵母菌AH109中的蛋白表达检测 | 第40页 |
| 2.3.2 所选文库质粒插入片段多样性检测 | 第40-41页 |
| 2.3.3 高严谨性筛选共转化子以及阳性克隆质粒的酶切鉴定 | 第41-43页 |
| 2.3.4 候选阳性克隆的测序分析结果 | 第43-44页 |
| 2.4. 讨论 | 第44-48页 |
| 第3章 PGRN与LIV-1相互作用部位的鉴定 | 第48-81页 |
| 3.1 实验材料和仪器 | 第48-55页 |
| 3.1.1 质粒和菌株 | 第48-49页 |
| 3.1.2 主要试剂 | 第49-50页 |
| 3.1.3 主要试剂的配制 | 第50-55页 |
| 3.1.4 主要仪器设备及材料 | 第55页 |
| 3.2 实验方法 | 第55-67页 |
| 3.2.1 LIV-1最长胞外段机最长胞内段基因的克隆以及相关表达载体的构建 | 第55-62页 |
| 3.2.2 PGRN与LIV-1结合部位的分析与鉴定 | 第62-63页 |
| 3.2.3 GST-Pull down检测PGRN与LIV-1 ectodomain及LIV-1 intracellulardomain的相互作用 | 第63-67页 |
| 3.3 实验结果 | 第67-79页 |
| 3.3.1 pGADT7LIV-1 ectodomain stop及pGADT7/LIV-1 intracellular domain stop酵母表达载体的构建 | 第67-68页 |
| 3.3.2 pGADT7/LIV-1 ectodomain △His stop及pGADT7/LIV-1 intracellulardomain △His stop酵母表达载体的构建 | 第68-69页 |
| 3.3.3 利用酵母双杂交系统鉴定PGRN与LIV-1的相互作用部位 | 第69-72页 |
| 3.3.4 GST-Pull down检测PGRN与LIV-1 ectodomain及LIV-1 intracellulardomain的相互作用 | 第72-79页 |
| 3.4 讨论 | 第79-81页 |
| 第4章 LIV-1在PGRN介导的肝癌细胞侵袭过程中的功能初探 | 第81-104页 |
| 4.1 实验材料和仪器 | 第81-84页 |
| 4.1.1 质粒、菌株和细胞 | 第81页 |
| 4.1.2 主要试剂 | 第81-82页 |
| 4.1.3 主要试剂的配制 | 第82-84页 |
| 4.1.4 主要仪器设备和材料 | 第84页 |
| 4.2 实验方法 | 第84-93页 |
| 4.2.1 表达hLIV-1 shRNA的慢病毒载体构建以及shRNA作用效果检测 | 第84-91页 |
| 4.2.2 建立LIV-1-knockdown HepG2细胞系 | 第91-92页 |
| 4.2.3 靶向人PGRN的siRNA的细胞转染及EMT相关分子的表达水平检测 | 第92-93页 |
| 4.3 实验结果 | 第93-100页 |
| 4.3.1 表达hLIV-1 shRNA或control shRNA的慢病毒载体的构建 | 第93-94页 |
| 4.3.2 携带hLIV-1全长序列的慢病毒载体构建 | 第94-95页 |
| 4.3.3 Real-time PCR检测hLIV-1 shRNA的作用效果 | 第95-96页 |
| 4.3.4 LIV-1-knockdown HepG2细胞系的建立 | 第96-97页 |
| 4.3.5 hPGRN siRNA的细胞转染及EMT相关分子的表达水平检测 | 第97-100页 |
| 4.4 讨论 | 第100-104页 |
| 第5章 结论 | 第104-106页 |
| 参考文献 | 第106-116页 |
| 附录 | 第116-124页 |
| 致谢 | 第124-126页 |
| 攻读硕士学位期间科研成果 | 第126页 |
