| 摘要 | 第4-5页 |
| abstract | 第5页 |
| 第一章 绪论 | 第9-16页 |
| 1.1 植物与N-酰基高丝氨酸内酯 | 第9页 |
| 1.2 植物感知细菌N-酰基高丝氨酸内酯 | 第9-10页 |
| 1.3 G蛋白偶联受体介导AHLs信号转导通路 | 第10-11页 |
| 1.4 N-酰基高丝氨酸内酯与GCR2的研究进展 | 第11页 |
| 1.5 生物信息学预测结合位点 | 第11-13页 |
| 1.5.1 分子对接简述 | 第12页 |
| 1.5.2 分子对接的分类 | 第12-13页 |
| 1.6 课题意义 | 第13-16页 |
| 第二章 N-3-羰基己酰基高丝氨酸内酯与GCR2蛋白的结合验证 | 第16-32页 |
| 2.1 前言 | 第16页 |
| 2.2 材料 | 第16-20页 |
| 2.2.1 工程菌株及质粒 | 第16页 |
| 2.2.2 主要试剂 | 第16-17页 |
| 2.2.3 引物 | 第17-18页 |
| 2.2.4 仪器设备 | 第18页 |
| 2.2.5 实验所用培养基与缓冲液 | 第18-20页 |
| 2.3 方法 | 第20-26页 |
| 2.3.1 大肠杆菌感受态制备 | 第20页 |
| 2.3.2 大肠杆菌DH5a的转化 | 第20页 |
| 2.3.3 质粒DNA提取步骤 | 第20-21页 |
| 2.3.4 琼脂糖凝胶回收步骤 | 第21-22页 |
| 2.3.5 GCR2及突变体的原核表达载体构建 | 第22-24页 |
| 2.3.6 GCR2蛋白的诱导步骤及检测 | 第24页 |
| 2.3.7 Western Blot操作步骤 | 第24-25页 |
| 2.3.8 GCR2及其突变体蛋白的纯化浓缩 | 第25页 |
| 2.3.9 微量热泳动检测GCR2与3OC6-HSL的结合特征 | 第25-26页 |
| 2.4 结果 | 第26-32页 |
| 2.4.1 GCR2原核表达载体的构建 | 第26页 |
| 2.4.2 GCR2蛋白的纯化及浓缩 | 第26-28页 |
| 2.4.3 微量热泳动分析GCR2与AHLs结合的受体动力学 | 第28-32页 |
| 第三章 GCR2中3OC6-HSL结合位点的分析 | 第32-46页 |
| 3.1 前言 | 第32页 |
| 3.2 材料与方法 | 第32-39页 |
| 3.2.1 工程菌株及质粒 | 第32页 |
| 3.2.2 主要试剂 | 第32-33页 |
| 3.2.3 仪器设备 | 第33-34页 |
| 3.2.4 引物 | 第34-35页 |
| 3.2.5 实验所用培养基与缓冲液 | 第35-36页 |
| 3.2.6 实验设置 | 第36页 |
| 3.2.7 对接流程 | 第36-37页 |
| 3.2.8 GCR2突变体原核表达载体的构建 | 第37-38页 |
| 3.2.9 GCR2突变体蛋白的诱导步骤及检测 | 第38页 |
| 3.2.10 GCR2突变体蛋白的纯化浓缩 | 第38-39页 |
| 3.3 结果 | 第39-46页 |
| 3.3.1 对接结果与分析 | 第39-41页 |
| 3.3.2 GCR2突变体蛋白原核表达载体的构建 | 第41-42页 |
| 3.3.3 GCR2突变体蛋白的诱导表达 | 第42-43页 |
| 3.3.4 微量热泳动检测GCR2突变体与3OC6-HSL的结合特征 | 第43-46页 |
| 第四章 AHL调控GCR2与G蛋白的互作 | 第46-58页 |
| 4.0 前言 | 第46页 |
| 4.1 材料 | 第46-48页 |
| 4.1.1 试验植株 | 第46-47页 |
| 4.1.2 主要试剂 | 第47页 |
| 4.1.3 培养基 | 第47-48页 |
| 4.1.4 仪器设备 | 第48页 |
| 4.2 实验方法 | 第48-51页 |
| 4.2.1 Y2HSUS所用基因GCR2和GPA1的克隆 | 第48-49页 |
| 4.2.2 Y2HSUS载体构建 | 第49页 |
| 4.2.3 酵母感受态细胞的制备 | 第49页 |
| 4.2.4 LiAc介导的质粒DNA转化酵母感受态细胞 | 第49-50页 |
| 4.2.5 泛素系统验证蛋白间相互作用 | 第50页 |
| 4.2.6 β-半乳糖苷酶活性定量分析 | 第50-51页 |
| 4.2.7 AHLs对GCR2与GPA1的影响 | 第51页 |
| 4.2.8 3OC6.HSL对GCR2与GPA1的影响 | 第51页 |
| 4.3 实验结果 | 第51-58页 |
| 4.3.1 Y2HSUS相关构建的自激活分析 | 第51-52页 |
| 4.3.2 GCR2与GPA1相互作用分析 | 第52-54页 |
| 4.3.3 不同AHL信号分子对GCR2与GPA1的影响 | 第54-55页 |
| 4.3.4 不同浓度3OC6-HSL对GCR2和GPA1的影响 | 第55页 |
| 4.3.5 β-半乳糖苷酶活性定量分析3OC6.HSL对GCR2与GPA1的影响 | 第55-58页 |
| 第五章 结论与展望 | 第58-60页 |
| 5.1 主要研究成果 | 第58-59页 |
| 5.2 展望 | 第59-60页 |
| 参考文献 | 第60-64页 |
| 攻读学位期间所取得相关科研成果 | 第64-66页 |
| 致谢 | 第66页 |
