| 摘要 | 第6-8页 |
| Abstract | 第8-9页 |
| 缩略词表 | 第10-12页 |
| 引言 | 第12-16页 |
| 实验材料 | 第16-20页 |
| 1.1 实验载体和菌株 | 第16页 |
| 1.2 实验试剂和耗材 | 第16-17页 |
| 1.3 实验仪器 | 第17-18页 |
| 1.4 试剂配制 | 第18-19页 |
| 1.4.1 LB培养基配制 | 第18-19页 |
| 1.4.2 琼脂糖凝胶配置 | 第19页 |
| 1.4.3 其他溶液的配制 | 第19页 |
| 1.5 软件 | 第19-20页 |
| 1.5.1 序列比对和拼接 | 第19页 |
| 1.5.2 扩增引物和延伸探针的设计和评价 | 第19页 |
| 1.5.3 数据收集和分析 | 第19-20页 |
| 实验方法 | 第20-38页 |
| 2.1 冠状病毒特异性和保守序列的分析与筛选 | 第20-24页 |
| 2.2 引物探针的设计、配制与测试 | 第24页 |
| 2.3 质粒构建和标准品制备 | 第24-28页 |
| 2.4 样本采集 | 第28页 |
| 2.5 样本总RNA的提取和逆转录 | 第28-31页 |
| 2.6 冠状病毒多重PCR-质谱检测方法实验过程 | 第31-34页 |
| 2.6.1 多重PCR扩增反应 | 第31-32页 |
| 2.6.2 SAP酶消化反应 | 第32页 |
| 2.6.3 单碱基延伸反应 | 第32-33页 |
| 2.6.4 样本的树脂纯化 | 第33-34页 |
| 2.6.5 MALDI-TOF质谱检测 | 第34页 |
| 2.7 冠状病毒多重PCR-质谱检测方法的应用 | 第34-37页 |
| 2.8 统计学分析 | 第37-38页 |
| 实验结果 | 第38-52页 |
| 3.1 冠状病毒多重PCR-质谱检测(mCoV-MS)方法的建立 | 第38-46页 |
| 3.1.1 冠状病毒多重PCR-质谱检测方法灵敏度分析 | 第38-40页 |
| 3.1.2 冠状病毒多重PCR-质谱检测方法特异性分析 | 第40-45页 |
| 3.1.3 冠状病毒多重PCR-质谱检测方法重复性分析 | 第45-46页 |
| 3.2 蝙蝠和啮齿类动物样本冠状病毒多重PCR-质谱检测结果 | 第46-49页 |
| 3.3 临床样本冠状病毒多重PCR-质谱检测结果 | 第49-52页 |
| 小结 | 第52-53页 |
| 讨论 | 第53-56页 |
| 文献综述 | 第56-71页 |
| 1 HCoV的致病性及流行情况 | 第57-63页 |
| HCoV-229E(α属) | 第59页 |
| HCoV-OC43(β属A谱系) | 第59页 |
| SARS-CoV(β属B谱系) | 第59-60页 |
| HCoV-NL63 (α属) | 第60页 |
| HCoV-HKU1(β属A谱系) | 第60-61页 |
| MERS-CoV(β属C谱系) | 第61-63页 |
| 2 HCoV的发育进化及变异重组 | 第63-66页 |
| 3 HCoV的检测诊断及预防治疗 | 第66-71页 |
| HCoV分离培养 | 第66-67页 |
| HCoV血清学试验 | 第67-68页 |
| HCoV分子检测 | 第68-69页 |
| HCoV预防治疗 | 第69-71页 |
| 参考文献 | 第71-82页 |
| 在学期间发表的学术论文 | 第82-83页 |
| 致谢 | 第83页 |
