| 学位论文数据集 | 第3-4页 |
| 摘要 | 第4-5页 |
| ABSTRACT | 第5-6页 |
| 第一章 绪论 | 第13-27页 |
| 1.1 HER-2的概述 | 第13-15页 |
| 1.2 抗体 | 第15-17页 |
| 1.3 纳米抗体 | 第17-21页 |
| 1.3.1 纳米抗体的结构 | 第17-18页 |
| 1.3.2 纳米抗体的特点 | 第18-19页 |
| 1.3.3 纳米抗体的制备 | 第19-21页 |
| 1.4 HER-2的双特异性纳米抗体 | 第21-23页 |
| 1.4.1 抗体的杀伤原理 | 第22页 |
| 1.4.2 人源化抗体的构建 | 第22-23页 |
| 1.5 本研究的主要内容和意义 | 第23-27页 |
| 1.5.1 研究的主要内容 | 第23页 |
| 1.5.2 研究的主要意义 | 第23-25页 |
| 1.5.3 设计路线 | 第25-27页 |
| 第二章 HER-2纳米抗体融合蛋白的原核表达纯化 | 第27-45页 |
| 2.1 引言 | 第27-29页 |
| 2.2 材料 | 第29-33页 |
| 2.2.1 载体菌株 | 第29-30页 |
| 2.2.2 主要试剂 | 第30-31页 |
| 2.2.3 主要溶液 | 第31-33页 |
| 2.2.4 仪器设备 | 第33页 |
| 2.3 方法 | 第33-40页 |
| 2.3.1 目的基因片段的获得及表达载体pET28a的构建 | 第34-35页 |
| 2.3.2 热激感受态细胞的制备 | 第35页 |
| 2.3.3 目的片段的转化 | 第35-36页 |
| 2.3.4 重组蛋白的BL21菌株表达 | 第36页 |
| 2.3.5 重组蛋白的纯化 | 第36-37页 |
| 2.3.6 重组蛋白可溶性分析(SDS-PAGE) | 第37-38页 |
| 2.3.7 重组蛋白可溶性分析(Tris-Tricine-PAGE) | 第38-39页 |
| 2.3.8 重组蛋白的BL21表达优化 | 第39-40页 |
| 2.4 结果与分析 | 第40-43页 |
| 2.4.1 目的基因 | 第40页 |
| 2.4.2 感受态效率测定 | 第40-41页 |
| 2.4.3 目的片段转化 | 第41页 |
| 2.4.4 重组蛋白在BL21中的表达量 | 第41页 |
| 2.4.5 重组蛋白可溶性分析(Tris-Tricine-PAGE) | 第41-42页 |
| 2.4.6 BL21最适表达条件 | 第42-43页 |
| 2.5 小结 | 第43-45页 |
| 第三章 HER-2纳米抗体的结合活性检测 | 第45-53页 |
| 3.1 引言 | 第45-46页 |
| 3.2 材料 | 第46-47页 |
| 3.2.1 载体菌株 | 第46页 |
| 3.2.2 主要试剂 | 第46-47页 |
| 3.2.3 主要溶液 | 第47页 |
| 3.2.4 仪器设备 | 第47页 |
| 3.3 方法 | 第47-50页 |
| 3.3.1 七个抗体与SK-BR-3靶细胞结合的流式检测 | 第47-48页 |
| 3.3.2 七个抗体与MDA-MB-453靶细胞结合的流式检测 | 第48页 |
| 3.3.3 四个高结合活性抗体的抗原表位检测 | 第48-49页 |
| 3.3.4 部分抗体与SK-BR-3靶细胞结合的荧光显微镜镜检 | 第49-50页 |
| 3.4 结果与分析 | 第50-52页 |
| 3.4.1 七种抗体与靶细胞SK-BR-3、MDA-MB-453结合的流式检测结果 | 第50-51页 |
| 3.4.2 四个高结合活性抗体的抗原表位检测 | 第51页 |
| 3.4.3 两个纳米抗体与SK-BR-3靶细胞结合荧光显微镜镜检图 | 第51-52页 |
| 3.5 小结 | 第52-53页 |
| 第四章 HER-2双特异性纳米抗体的构建及鉴定 | 第53-67页 |
| 4.1 引言 | 第53页 |
| 4.2 材料 | 第53-54页 |
| 4.2.1 载体菌株 | 第53页 |
| 4.2.2 主要试剂 | 第53-54页 |
| 4.2.3 主要溶液 | 第54页 |
| 4.2.4 仪器设备 | 第54页 |
| 4.3 方法 | 第54-63页 |
| 4.3.1 真核表达重组质粒的构建 | 第55-57页 |
| 4.3.2 293细胞的传代培养 | 第57页 |
| 4.3.3 细胞的复苏与冰冻保存 | 第57-58页 |
| 4.3.4 pFUSE人源化重组质粒的大提 | 第58-59页 |
| 4.3.5 质粒瞬时转染 | 第59-60页 |
| 4.3.6 双特异性纳米抗体IgG的表达纯化 | 第60页 |
| 4.3.7 双特异性纳米抗体IgG蛋白WB检测 | 第60-61页 |
| 4.3.8 双特异性纳米抗体IgG的ELISA活性鉴定 | 第61页 |
| 4.3.9 双特异性纳米抗体IgG的流式细胞结合实验 | 第61-62页 |
| 4.3.10 双特异性纳米抗体IgG的肿瘤细胞杀伤检测 | 第62-63页 |
| 4.4 结果与分析 | 第63-66页 |
| 4.4.1 WB检测结果 | 第63页 |
| 4.4.2 ELISA活性鉴定结果 | 第63页 |
| 4.4.3 流式细胞结合检测结果 | 第63-66页 |
| 4.4.4 肿瘤细胞杀伤检测结果 | 第66页 |
| 4.5 小结 | 第66-67页 |
| 第五章 结论与展望 | 第67-69页 |
| 5.1 结论 | 第67-68页 |
| 5.2 展望 | 第68-69页 |
| 参考文献 | 第69-73页 |
| 附录 | 第73-79页 |
| 致谢 | 第79-81页 |
| 作者和导师简介 | 第81-82页 |
| 附件 | 第82-83页 |
