| 学位论文数据集 | 第3-4页 |
| 摘要 | 第4-6页 |
| ABSTRACT | 第6-7页 |
| 缩写简表 | 第16-17页 |
| 第一章 绪论 | 第17-29页 |
| 1.1 O-甲基化反应 | 第17-19页 |
| 1.1.1 O-甲基化反应简介 | 第17-18页 |
| 1.1.2 酶促O-甲基化反应 | 第18-19页 |
| 1.2 O-甲基转移酶 | 第19-22页 |
| 1.2.1 O-甲基转移酶简介 | 第19-21页 |
| 1.2.2 O-甲基转移酶催化机理与分类 | 第21页 |
| 1.2.3 拟南芥咖啡酸O-甲基转移酶 | 第21-22页 |
| 1.3 褪黑素 | 第22-25页 |
| 1.3.1 褪黑素简介 | 第22页 |
| 1.3.2 褪黑素的合成 | 第22-25页 |
| 1.4 酶分子改造 | 第25-26页 |
| 1.4.1 定向进化 | 第25页 |
| 1.4.2 半理性设计 | 第25-26页 |
| 1.4.3 理性设计 | 第26页 |
| 1.5 分子模拟 | 第26-27页 |
| 1.5.1 量子力学模拟 | 第26-27页 |
| 1.5.2 分子力学模拟 | 第27页 |
| 1.5.3 分子动力学模拟 | 第27页 |
| 1.5.4 分子对接 | 第27页 |
| 1.6 课题研究的意义和内容 | 第27-29页 |
| 第二章 O-甲基转移酶库的建立 | 第29-45页 |
| 2.1 引言 | 第29页 |
| 2.2 材料与方法 | 第29-36页 |
| 2.2.1 实验材料与仪器 | 第29-30页 |
| 2.2.1.1 实验材料 | 第29-30页 |
| 2.2.1.2 主要仪器 | 第30页 |
| 2.2.2 试验方法 | 第30-36页 |
| 2.2.2.1 O-甲基转移酶的克隆 | 第30-34页 |
| 2.2.2.2 O-甲基转移酶的表达及纯化 | 第34-36页 |
| 2.3 结果与讨论 | 第36-44页 |
| 2.3.1 O-甲基转移酶的克隆 | 第36-40页 |
| 2.3.1.1 O-甲基转移酶的基因挖掘 | 第36-37页 |
| 2.3.1.2 目的基因扩增 | 第37-38页 |
| 2.3.1.3 重组质粒的验证 | 第38-40页 |
| 2.3.2 O-甲基转移酶表达情况分析 | 第40-43页 |
| 2.3.3 O-甲基转移酶的纯化 | 第43-44页 |
| 2.3.3.1 蛋白纯度表征 | 第43页 |
| 2.3.3.2 蛋白浓度的标准曲线 | 第43-44页 |
| 2.4 小结 | 第44-45页 |
| 第三章 O-甲基转移酶的多底物筛选 | 第45-55页 |
| 3.1 引言 | 第45页 |
| 3.2 材料与方法 | 第45-49页 |
| 3.2.1 实验材料与仪器 | 第45-46页 |
| 3.2.1.1 实验材料 | 第45页 |
| 3.2.1.2 主要仪器 | 第45-46页 |
| 3.2.2 试验方法 | 第46-49页 |
| 3.2.2.1 O-甲基转移酶催化反应条件 | 第46-47页 |
| 3.2.2.2 多底物催化反应的检测方法 | 第47-49页 |
| 3.3 结果与讨论 | 第49-53页 |
| 3.3.1 底物谱筛选结果 | 第49-51页 |
| 3.3.2 建立检测方法及鉴定产物 | 第51-53页 |
| 3.4 小结 | 第53-55页 |
| 第四章 O-甲基转移酶AtCOMT的理性设计 | 第55-71页 |
| 4.1 引言 | 第55-56页 |
| 4.2 材料与方法 | 第56-60页 |
| 4.2.1 实验材料与仪器 | 第56页 |
| 4.2.1.1 实验材料 | 第56页 |
| 4.2.1.2 主要仪器 | 第56页 |
| 4.2.2 试验方法 | 第56-60页 |
| 4.2.2.1 O-甲基转移酶AtCOMT同源建模 | 第57页 |
| 4.2.2.2 O-甲基转移酶AtCOMT与底物分子对接分析 | 第57页 |
| 4.2.2.3 构建突变体 | 第57-60页 |
| 4.2.2.4 突变体蛋白表达和纯化 | 第60页 |
| 4.2.2.5 突变体分析 | 第60页 |
| 4.3 结果与讨论 | 第60-69页 |
| 4.3.1 同源建模分析 | 第60-64页 |
| 4.3.2 分子构象分析 | 第64-65页 |
| 4.3.3 突变体设计 | 第65-68页 |
| 4.3.3.1 引入长链氨基酸 | 第66页 |
| 4.3.3.2 减小底物结合口袋入口位阻 | 第66页 |
| 4.3.3.3 引入其他作用力 | 第66-68页 |
| 4.3.4 突变体分析 | 第68-69页 |
| 4.4 小结 | 第69-71页 |
| 第五章 AtCOMT突变体的催化性质表征与分子动力学模拟 | 第71-81页 |
| 5.1 引言 | 第71页 |
| 5.2 材料与方法 | 第71-73页 |
| 5.2.1 实验材料与仪器 | 第71-72页 |
| 5.2.1.1 实验材料 | 第71页 |
| 5.2.1.2 主要仪器 | 第71-72页 |
| 5.2.2 试验方法 | 第72-73页 |
| 5.2.2.1 重组蛋白的诱导表达及纯化 | 第72页 |
| 5.2.2.2 分析及计算方法 | 第72页 |
| 5.2.2.3 表观动力学常数测定 | 第72页 |
| 5.2.2.4 分子模拟 | 第72-73页 |
| 5.3 结果与讨论 | 第73-79页 |
| 5.3.1 AtCOMT及其突变体的动力学常数分析 | 第73-75页 |
| 5.3.2 AtCOMT及C296F-Q310L-V314T的分子动力学模拟分析 | 第75-79页 |
| 5.3.2.1 AtCOMT及C296F-Q310L-V314T的蛋白-底物复合物构象分析 | 第75-77页 |
| 5.3.2.2 AtCOMT及C296F-Q310L-V314T的模拟体系平衡情况分析 | 第77-78页 |
| 5.3.2.3 AtCOMT及C296F-Q310L-V314T的结合自由能分析 | 第78-79页 |
| 5.4 小结 | 第79-81页 |
| 第六章 总结与展望 | 第81-83页 |
| 6.1 结论 | 第81-82页 |
| 6.2 展望 | 第82-83页 |
| 参考文献 | 第83-91页 |
| 致谢 | 第91-93页 |
| 研究成果及发表的学术论文 | 第93-95页 |
| 导师及作者简介 | 第95-97页 |
| 附件 | 第97-98页 |
