| 摘要 | 第4-9页 |
| ABSTRACT | 第9-15页 |
| 主要缩略语中英文索引 | 第20-22页 |
| 第1章 绪论 | 第22-28页 |
| 第2章 实验材料 | 第28-34页 |
| 2.1 主要实验试剂 | 第28-31页 |
| 2.2 MICRORNA公共数据库及在线软件 | 第31页 |
| 2.3 主要实验器材与实验仪器 | 第31-34页 |
| 第3章 实验方法 | 第34-44页 |
| 3.1 收集整理临床资料 | 第34页 |
| 3.1.1 统计患者信息 | 第34页 |
| 3.1.2 采集血液标本 | 第34页 |
| 3.2 实时定量PCR(REALTIME-QUANTITATIVEPCR,RT-QPCR) | 第34-35页 |
| 3.3 生物信息学预测 | 第35-37页 |
| 3.3.1 MIR-377序列、基因定位及保守性 | 第35页 |
| 3.3.2 MicroRNA靶基因预测 | 第35-36页 |
| 3.3.3 MicroRNA.org网站预测 | 第36页 |
| 3.3.4 MiR-377与DNMT13’-UTR结合自由能 | 第36页 |
| 3.3.5 GPIHBP1启动子区域序列 | 第36-37页 |
| 3.3.6 GPIHBP1启动子区域甲基化情况 | 第37页 |
| 3.4 细胞培养 | 第37-38页 |
| 3.5 细胞蛋白抽提 | 第38页 |
| 3.6 BCA蛋白定量 | 第38-39页 |
| 3.7 蛋白质印迹检测(WESTERNBLOT) | 第39页 |
| 3.8 双荧光素酶报告基因构建与分析 | 第39-40页 |
| 3.9 DNMT1活性检测 | 第40页 |
| 3.10 亚硫酸盐测序 | 第40页 |
| 3.11 LPL与GPIHBP1结合试验 | 第40-41页 |
| 3.12 APOE~(-/-)小鼠的饲养与动物模型的构建 | 第41页 |
| 3.13 动物组织取材 | 第41-42页 |
| 3.14 小鼠主动脉内皮细胞提取 | 第42页 |
| 3.15 HE染色 | 第42页 |
| 3.16 油红O染色 | 第42-43页 |
| 3.17 MASSON染色 | 第43页 |
| 3.18 统计分析 | 第43-44页 |
| 第4章 实验结果 | 第44-68页 |
| 4.1 CHD患者血清中各种MICRORNAS表达情况 | 第44-46页 |
| 4.1.1 临床患者分组 | 第44页 |
| 4.1.2 CHD合并高脂血症患者血清中MICRORNAS表达水平 | 第44-45页 |
| 4.1.3 CHD合并高甘油三酯血症患者血清中MIR-145、MIR-377和MIR-410表达水平 | 第45-46页 |
| 4.2 生物信息学预测MIR-377与DNMT1特异性结合 | 第46-49页 |
| 4.2.1 不同物种间MIR-377序列高度保守 | 第46-47页 |
| 4.2.2 MIR-377能与DNMT13’-UTR特异性结合 | 第47-48页 |
| 4.2.3 MIR-377与GPIHBP1、LPL无特异性结合作用 | 第48-49页 |
| 4.3 荧光素酶报告基因检测MIR-377与DNMT1特异性结合 | 第49-50页 |
| 4.3.1 MIR-377与DNMT1特异性结合 | 第49-50页 |
| 4.3.2 MIR-377不能和GPIHBP1、LPL特异性结合 | 第50页 |
| 4.4 MIR-377抑制细胞内DNMT1的表达和活性 | 第50-53页 |
| 4.4.1 MIR-377抑制细胞内DNMT1活性 | 第50-51页 |
| 4.4.2 MIR-377呈现浓度依赖性抑制DNMT1表达 | 第51-52页 |
| 4.4.3 MIR-377呈现时间依赖性抑制DNMT1表达 | 第52-53页 |
| 4.5 DNMT1促进GPIHBP1启动子DNA甲基化而抑制其表达 | 第53-57页 |
| 4.5.1 生物信息学预测GPIHBP1启动子区域CPG岛序列 | 第53-54页 |
| 4.5.2 DNMT1促进GPIHBP1启动子DNA甲基化 | 第54-55页 |
| 4.5.3 DNMT1抑制GPIHBP1表达 | 第55-57页 |
| 4.6 MIR-377上调GPIHBP1表达并增加其与LPL结合量 | 第57-59页 |
| 4.6.1 MIR-377抑制DNMT1降低GPIHBP1启动子甲基化水平 | 第57页 |
| 4.6.2 MIR-377抑制DNMT1上调GPIHBP1表达 | 第57-59页 |
| 4.6.3 MIR-377抑制DNMT1增加GPIHBP1与LPL结合量 | 第59页 |
| 4.7 MIR-377降低APOE~(-/-)小鼠血浆甘油三酯水平 | 第59-62页 |
| 4.7.1 MIR-377降低主动脉内皮细胞中DNMT1表达及活性 | 第59-60页 |
| 4.7.2 MIR-377升高主动脉内皮细胞中GPIHBP1表达 | 第60-61页 |
| 4.7.3 MIR-377增加主动脉内皮细胞表面GPIHBP1与LPL结合量 | 第61-62页 |
| 4.7.4 MIR-377降低APOE~(-/-)小鼠血浆TG水平 | 第62页 |
| 4.8 MIR-377抑制APOE~(-/-)小鼠AS斑块形成 | 第62-68页 |
| 4.8.1 MIR-377减少APOE~(-/-)小鼠主动脉弓处斑块面积 | 第62-63页 |
| 4.8.2 MIR-377减少APOE~(-/-)小鼠主动脉血管壁内脂质蓄积 | 第63-64页 |
| 4.8.3 MIR-377减少APOE~(-/-)小鼠主动脉瓣膜处AS斑块形成 | 第64-68页 |
| 第5章 讨论 | 第68-72页 |
| 第6章 结论 | 第72-74页 |
| 参考文献 | 第74-80页 |
| 文献综述 | 第80-94页 |
| 参考文献 | 第88-94页 |
| 攻读学位期间发表论文 | 第94-96页 |
| 致谢 | 第96-98页 |
| 附件 | 第98页 |
