| 摘要 | 第8-10页 |
| Abstract | 第10-11页 |
| 文献综述 | 第12-21页 |
| 1 生物防治与寄生蜂 | 第12-13页 |
| 2 昆虫的天然免疫系统 | 第13页 |
| 3 昆虫免疫相关基因的调控作用 | 第13-15页 |
| 4 钙调磷酸酶的功能 | 第15-16页 |
| 5 昆虫转录组研究进展 | 第16-17页 |
| 6 研究目的和意义 | 第17-18页 |
| 参考文献 | 第18-21页 |
| 第一章 腰带长体茧蜂寄生亚洲玉米螟后转录组分析及免疫相关基因检测 | 第21-53页 |
| 1 前言 | 第21页 |
| 2 材料与方法 | 第21-28页 |
| 2.1 供试昆虫 | 第21-22页 |
| 2.2 主要试剂 | 第22页 |
| 2.3 主要仪器 | 第22页 |
| 2.4 对腰带长体茧峰寄生后亚洲玉米螟幼虫的转录组分析 | 第22-25页 |
| 2.4.1 Total RNA的提取 | 第22-23页 |
| 2.4.2 Oligo(dT)富集mRNA | 第23页 |
| 2.4.3 片段化mRNA | 第23页 |
| 2.4.4 反转录合成cDNA | 第23-24页 |
| 2.4.5 上机测序 | 第24页 |
| 2.4.6 生物信息分析流程 | 第24-25页 |
| 2.5 腰带长体茧蜂寄生亚洲玉米螟后免疫相关基因表达的检测 | 第25-28页 |
| 2.5.1 腰带长体茧蜂寄生4龄初亚洲玉米螟幼虫 | 第25页 |
| 2.5.2 总RNA提取及质量检测 | 第25页 |
| 2.5.3 总RNA质量检测 | 第25页 |
| 2.5.4 cDNA的合成 | 第25-27页 |
| 2.5.5 数据分析 | 第27-28页 |
| 3 结果与分析 | 第28-49页 |
| 3.1 原始测序数据质控 | 第28页 |
| 3.2 测序错误率分布检查 | 第28-29页 |
| 3.3 拼接转录本长度分布 | 第29-30页 |
| 3.4 基因功能注释 | 第30-34页 |
| 3.4.1 Nr注释结果 | 第30-31页 |
| 3.4.2 GO分类 | 第31-32页 |
| 3.4.3 KOG分类 | 第32-33页 |
| 3.4.4 KEGG分类 | 第33-34页 |
| 3.5 基因表达水平分析 | 第34-35页 |
| 3.5.1 参考序列比对 | 第34-35页 |
| 3.5.2 基因FPKM密度分布图 | 第35页 |
| 3.6 差异表达分析 | 第35-44页 |
| 3.6.1 样品间相关性检查 | 第35-38页 |
| 3.6.2 差异基因筛选 | 第38-40页 |
| 3.6.3 GO富集分析 | 第40-43页 |
| 3.6.4 对照组与寄生后处理组不同时间免疫基因比较 | 第43-44页 |
| 3.7 腰带长体茧蜂寄生亚洲玉米螟后免疫相关基因表达水平分析 | 第44-49页 |
| 3.7.1 腰带长体茧蜂寄生对亚洲玉米螟幼虫GRP3基因转录水平表达的影响 | 第44-45页 |
| 3.7.2 腰带长体茧蜂寄生对亚洲玉米螟幼虫PAP基因转录水平表达的影响 | 第45-46页 |
| 3.7.3 腰带长体茧蜂寄生对亚洲玉米螟幼虫Serpin1基因表达的影响 | 第46-47页 |
| 3.7.4 腰带长体茧蜂寄生对亚洲玉米螟幼虫PPO2基因转录水平表达的影响 | 第47页 |
| 3.7.5 腰带长体茧蜂寄生对亚洲玉米螟幼虫DDC基因转录水平表达的影响 | 第47-48页 |
| 3.7.6 腰带长体茧蜂寄生对亚洲玉米螟幼虫JHDK基因转录水平表达的影响 | 第48-49页 |
| 4 讨论 | 第49-53页 |
| 4.1 腰带长体茧峰寄生后亚洲玉米螟幼虫的转录组分析 | 第49-50页 |
| 4.2 腰带长体茧蜂茧蜂寄生后对亚洲玉米螟免疫基因的相关影响 | 第50-51页 |
| 4.3 转录组测序的偏好性 | 第51-52页 |
| 4.4 展望 | 第52-53页 |
| 第二章 亚洲玉米螟钙调磷酸酶A亚基(CaNA)的克隆及表达分析 | 第53-90页 |
| 1 前言 | 第53页 |
| 2 材料与方法 | 第53-68页 |
| 2.1 供试昆虫 | 第53页 |
| 2.2 主要试剂 | 第53-54页 |
| 2.3 主要仪器 | 第54页 |
| 2.4 亚洲玉米螟总RNA的提取及cDNA的合成 | 第54-56页 |
| 2.4.1 总RNA的提取 | 第54页 |
| 2.4.2 总RNA质量检测 | 第54页 |
| 2.4.3 生成RACE-Ready cDNA | 第54-56页 |
| 2.5 Of-CaNA基因的3'RACE | 第56-60页 |
| 2.5.1 引物设计 | 第56页 |
| 2.5.2 操作步骤 | 第56-58页 |
| 2.5.3 目的基因片段的回收纯化 | 第58页 |
| 2.5.4 目的片段与克隆载体连接 | 第58-59页 |
| 2.5.5 连接载体转化 | 第59页 |
| 2.5.6 单菌落PCR检测 | 第59页 |
| 2.5.7 质粒DNA提取及测序 | 第59-60页 |
| 2.6 Of-CaNA基因结构域序列的扩增 | 第60-61页 |
| 2.7 Of-CaNA基因结构域序列的生物信息学分析 | 第61-62页 |
| 2.7.1 亚洲玉米螟CaNA基因结构域编码蛋白的理化性质分析 | 第61-62页 |
| 2.7.2 亚洲玉米螟CaNA基因编码蛋白的结构和功能分析 | 第62页 |
| 2.7.3 基于Of-CaNA核苷酸序列推导的氨基酸序列系统进化树构建 | 第62页 |
| 2.8 Of-CaNA重组蛋白原核表达 | 第62-66页 |
| 2.8.1 重组表达质粒pET-28a(+)-Of-CaNA的构建 | 第62-64页 |
| 2.8.2 重组表达 | 第64-65页 |
| 2.8.3 表达蛋白的Western blotting鉴定 | 第65-66页 |
| 2.9 腰带长体茧蜂寄生亚洲玉米螟后CaNA基因表达的检测 | 第66页 |
| 2.9.1 腰带长体茧蜂寄生4龄初亚洲玉米螟幼虫 | 第66页 |
| 2.9.2 总RNA提取及质量检测 | 第66页 |
| 2.9.3 cDNA的合成 | 第66页 |
| 2.10 亚洲玉米螟幼虫注射CaNA-dsRNA后表达水平的检测 | 第66-68页 |
| 2.10.1 CaNA RNAi引物设计 | 第66页 |
| 2.10.2 dsRNA的制备 | 第66-67页 |
| 2.10.3 亚洲玉米螟幼虫dsRNA的注射、取样及Real timePCR检测 | 第67-68页 |
| 2.11 数据分析 | 第68页 |
| 3 结果与分析 | 第68-86页 |
| 3.1 Of-CaNA基因的克隆 | 第68-70页 |
| 3.1.1 Of-CaNA基因cDNA序列的3'RACE | 第68-69页 |
| 3.1.2 Of-CaNA基因部分cDNA序列的克隆及序列验证 | 第69页 |
| 3.1.3 Of-CaNA基因结构域的亚克隆 | 第69-70页 |
| 3.2 Of-CaNA基因序列的生物信息学分析 | 第70-78页 |
| 3.2.1 Of-CaNA基因结构域cDNA核苷酸序列及推导的氨基酸序列 | 第70-72页 |
| 3.2.2 Of-CaNA基因核苷酸序列和氨基酸序列的BlastP分析 | 第72-74页 |
| 3.2.3 Of-CaNA基因的系统进化树 | 第74-75页 |
| 3.2.4 Of-CaNA基因的信号肽、跨膜结构域及翻译后修饰分析 | 第75-77页 |
| 3.2.5 Of-CaNA基因编码蛋白的二级结构、卷曲螺旋、疏水性和三维结构分析 | 第77-78页 |
| 3.3 Of-CaNA基因的原核表达 | 第78-84页 |
| 3.3.1 Of-CaNA-pET-28a基因表达载体的构建 | 第78-80页 |
| 3.3.2 pET-28a-Of-CaNA原核表达条件的筛选 | 第80-84页 |
| 3.4 腰带长体茧蜂寄生对亚洲玉米螟CaNA基因转录水平表达的影响 | 第84页 |
| 3.5 亚洲玉米螟幼虫CaNA基因RNA干扰 | 第84-86页 |
| 3.5.1 特异性T7引物与模板PCR | 第84-85页 |
| 3.5.2 CaNA dsRNA的制备验证 | 第85页 |
| 3.5.3 亚洲玉米螟幼虫CaNA基因RNA干扰后CaNA表达水平分析 | 第85-86页 |
| 4 讨论 | 第86-90页 |
| 4.1 Of-CaNA基因的结构特征分析 | 第86-87页 |
| 4.2 钙调磷酸酶调控昆虫免疫反应 | 第87-88页 |
| 4.3 亚洲玉米螟幼虫CaNA基因RNAi | 第88页 |
| 4.4 展望 | 第88-90页 |
| 参考文献 | 第90-94页 |
| 致谢 | 第94-95页 |
| 攻读硕士学位期间发表的学术论文 | 第95-96页 |
