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乙型肝炎治疗性MVA载体疫苗的基础研究

内容提要第1-9页
第一章 前言第9-20页
   ·乙型肝炎的简介第9-13页
     ·当前乙型肝炎的流行性状况第9页
     ·乙型肝炎病(HBV)的分子生物学特征第9-11页
     ·乙型肝炎的治疗现状第11-13页
   ·乙型肝炎治疗性疫苗的研究第13-17页
     ·治疗性HBV 疫苗的研究历史第13-15页
     ·MVA 载体疫苗的研究进展第15页
     ·prime-boost 策略的应用第15-16页
     ·不同细胞因子免疫佐剂的应用第16-17页
   ·HBV C 基因及其编码的核心蛋白的概述第17-19页
     ·HBV C 基因及其编码蛋白第17-18页
     ·核心蛋白在机体免疫调节中的作用第18-19页
   ·本研究的设计方案和思路第19-20页
     ·目的抗原的选择第19页
     ·设计思路第19-20页
第二章 重组MVA 载体疫苗的构建第20-36页
   ·实验材料第21-23页
     ·载体、引物第21页
     ·主要试剂第21-22页
     ·主要溶液第22页
     ·主要仪器第22-23页
   ·实验方法第23-30页
     ·测序质粒T-E4 的构建第23-24页
     ·穿梭质粒PSC11-E4 的构建第24-26页
     ·质粒的大量提取第26-27页
     ·鸡胚成纤维细胞(CEF)的制备第27页
     ·重组MVA 病毒的构建及筛选纯化第27-29页
     ·阳性重组MVA 病毒鉴定第29-30页
   ·试验结果第30-35页
     ·测序质粒的构建结果第30-32页
     ·穿梭质粒的构建结果第32-34页
     ·重组病毒rMVA-E4 纯度的鉴定第34-35页
   ·本章小结第35-36页
第三章 重组MVA 病毒滴定及抗原性鉴定第36-47页
   ·实验材料第36-38页
     ·病毒株、细胞株第36页
     ·主要试剂第36-37页
     ·主要实验溶液的配置第37-38页
     ·主要实验仪器第38页
   ·实验方法第38-41页
     ·重组病毒的提纯及滴定第38-39页
     ·电镜负染观察病毒形态第39页
     ·间接荧光免疫染色法鉴定目的抗原的表达位置第39页
     ·重组病毒在COS-7 细胞系中的抗原表达第39-40页
     ·Western-blot 检测重组病毒的蛋白表达第40-41页
   ·实验结果第41-46页
     ·重组MVA 病毒载体疫苗滴度测定第41-42页
     ·电镜负染观察病毒形态第42-43页
     ·间接免疫荧光染色法鉴定目的抗原表达结果第43-44页
     ·重组病毒表达目的蛋白的抗原性鉴定第44-45页
     ·Western-blot 检测结果第45-46页
   ·本章小结第46-47页
第四章 重组MVA 载体疫苗免疫效果初步研究第47-60页
   ·实验材料第47-48页
     ·免疫动物疫苗及佐剂第47-48页
     ·主要试剂及仪器第48页
     ·抗原刺激肽第48页
     ·实验动物第48页
   ·实验方法第48-54页
     ·MVA 载体疫苗采用不同免疫策略的比较第48-53页
       ·动物实验设计第48-49页
       ·体液抗体水平检测第49页
       ·CTL 实验第49-51页
       ·ELISPOT 实验第51-53页
     ·不同细胞因子对治疗性HBV 疫苗的增强作用第53-54页
       ·动物实验设计第53-54页
       ·体液抗体水平检测第54页
       ·CTL 试验第54页
       ·ELISPOT 试验第54页
   ·试验结果第54-59页
     ·体液免疫结果第54-56页
       ·采用不同免疫策略时的体液免疫结果第54-56页
       ·细胞因子联合免疫组体液免疫结果第56页
     ·细胞免疫结果第56-59页
       ·采用不同免疫策略时的细胞免疫分析第56-58页
         ·ELISPOT 结果分析第56-57页
         ·CTL 结果试验第57-58页
       ·细胞因子联合免疫组细胞免疫分析第58-59页
         ·ELISPOT 结果分析第58页
         ·CTL 结果试验第58-59页
   ·本章小结第59-60页
第五章 结论第60-62页
参考文献第62-67页
附录第67-68页
中文摘要第68-71页
ABSTRACT第71-74页
致谢第74页

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