| 摘要 | 第3-6页 |
| abstract | 第6-9页 |
| 中英文缩略词表 | 第13-15页 |
| 前言 | 第15-17页 |
| 第一章 肝癌组织和肝癌细胞中GRP78与FAT10表达的关系及其临床意义 | 第17-37页 |
| 引言 | 第17-18页 |
| 材料和方法 | 第18-30页 |
| 1.材料 | 第18-24页 |
| 1.1 临床标本的收集 | 第18-20页 |
| 1.2 实验所需细胞株 | 第20页 |
| 1.3 实验所需试剂 | 第20-21页 |
| 1.4 自配试剂 | 第21-23页 |
| 1.5 主要仪器设备 | 第23-24页 |
| 1.6 Real-timePCR引物序列 | 第24页 |
| 2.实验方法 | 第24-30页 |
| 2.1 细胞培养 | 第24-25页 |
| 2.2 免疫组化(IHC) | 第25-26页 |
| 2.3 HE染色 | 第26-27页 |
| 2.4 蛋白免疫印迹反应(Westernblot) | 第27-28页 |
| 2.5 RNA的提取及聚合酶链反应(PCR) | 第28-30页 |
| 2.6 统计学分析 | 第30页 |
| 结果 | 第30-35页 |
| 1.肝癌组织及癌旁组织中GRP78及FAT10的表达情况 | 第30-32页 |
| 2.GRP78和FAT10在肝癌组织中表达的相关性分析 | 第32页 |
| 3.五株肝癌细胞和正常细胞株人肝细胞HL7702中GRP78和FAT10的表达情况 | 第32-33页 |
| 4.GRP78和FAT10在肝癌中的表达与临床病理特征的相关性分析 | 第33-34页 |
| 5.肝癌患者GRP78和FAT10的不同表达特征与术后总生存期的关系分析 | 第34页 |
| 6.影响生存时间的多因素Cox回归分析 | 第34-35页 |
| 讨论 | 第35-36页 |
| 结论 | 第36-37页 |
| 第二章 GRP78调控FAT10表达对肝癌细胞增殖的影响 | 第37-54页 |
| 引言 | 第37页 |
| 材料与方法 | 第37-44页 |
| 1.材料 | 第37-38页 |
| 1.1 实验细胞 | 第37-38页 |
| 1.2 实验试剂 | 第38页 |
| 1.3 实验裸鼠 | 第38页 |
| 1.4 自配试剂 | 第38页 |
| 1.5 主要仪器设备 | 第38页 |
| 2.方法 | 第38-44页 |
| 2.1 细胞培养 | 第38页 |
| 2.2 蛋白免疫印迹反应(Westernblot) | 第38页 |
| 2.3 RNA的提取及聚合酶链反应(PCR) | 第38页 |
| 2.4 干扰质粒与过表达质粒的获取 | 第38-41页 |
| 2.5 转染肝癌细胞 | 第41页 |
| 2.6 EdU实验 | 第41-42页 |
| 2.7 构建肝癌细胞稳转细胞系 | 第42页 |
| 2.8 动物实验 | 第42-43页 |
| 2.9 平板克隆形成实验 | 第43-44页 |
| 2.10 数据分析及统计方法 | 第44页 |
| 结果 | 第44-51页 |
| 第一节 体外和体内实验观察改变GRP78的表达对FAT10表达及肝癌细胞增殖能力的影响 | 第44-50页 |
| 1.1 筛选最佳GRP78和FAT10干扰质粒或干扰慢病毒 | 第44-45页 |
| 1.2 观察在肝癌细胞中改变GRP78的表达后FAT10表达变化 | 第45页 |
| 1.3 观察降低4株肝癌细胞GRP78的表达对肝癌细胞增殖的影响 | 第45-47页 |
| 1.4 改变肝癌细胞中GRP78的表达对FAT10与P53蛋白表达的影响 | 第47页 |
| 1.5 .体内实验证实抑制GRP78的表达对肝癌细胞增殖能力的影响 | 第47-50页 |
| 第二节 FAT10是GRP78促进肝癌细胞增殖的关键效应分子 | 第50-51页 |
| 2.1 在HCCLM3细胞株中抑制GRP78的同时增加FAT10的表达,观察GRP78和FAT10的蛋白表达及肝癌细胞的增殖能力变化 | 第50页 |
| 2.2 在MHCC97H细胞株中增加GRP78表达的同时抑制FAT10的表达,观察GRP78和FAT10的蛋白表达及肝癌细胞的增殖能力变化 | 第50-51页 |
| 讨论 | 第51-53页 |
| 结论 | 第53-54页 |
| 第三章 GRP78调控FAT10表达的分子机制研究 | 第54-66页 |
| 前言 | 第54页 |
| 材料和方法 | 第54-57页 |
| 1.材料 | 第54-55页 |
| 1.1 实验细胞 | 第54页 |
| 1.2 实验试剂 | 第54-55页 |
| 1.3 主要仪器设备 | 第55页 |
| 1.4 自配试剂 | 第55页 |
| 2.方法 | 第55-57页 |
| 2.1 细胞培养 | 第55页 |
| 2.2 蛋白免疫印迹反应(Westernblot) | 第55页 |
| 2.3 Lipofectamine3000法转染肝癌细胞 | 第55-56页 |
| 2.4 免疫共沉淀 | 第56页 |
| 2.5 核蛋白和胞浆蛋白提取 | 第56页 |
| 2.6 激光共聚焦免疫荧光实验 | 第56-57页 |
| 2.7 抑制剂的配制与使用 | 第57页 |
| 2.8 数据分析及统计方法 | 第57页 |
| 结果 | 第57-63页 |
| 第一节 GRP78通过促进NF-κBP65的入核而增加FAT10的表达 | 第57-60页 |
| 1.1 GRP78调控FAT10的表达影响肝癌细胞增殖过程中与FAT10不直接结合 | 第57-58页 |
| 1.2 GRP78促进NF-κBP65的入核而增加FAT10的表达 | 第58-60页 |
| 第二节 GRP78能促进IKK的磷酸化而增加FAT10的表达 | 第60-63页 |
| 2.1 GRP78通过调节IκBα的磷酸化水平而调控FAT10的表达 | 第60-62页 |
| 2.2 GRP78通过调节IKKα/β的磷酸化水平而调控FAT10的表达 | 第62-63页 |
| 讨论 | 第63-65页 |
| 结论 | 第65-66页 |
| 全文总结 | 第66-70页 |
| 结论 | 第70-71页 |
| 致谢 | 第71-72页 |
| 参考文献 | 第72-75页 |
| 攻读学位期间的研究成果及荣誉 | 第75-76页 |
| 综述 GRP78在恶性肿瘤中的研究进展 | 第76-82页 |
| 参考文献 | 第80-82页 |
