| 摘要 | 第5-8页 |
| ABSTRACT | 第8-11页 |
| 第一章 绪论 | 第16-30页 |
| 1.1 研究工作的背景与意义 | 第16-23页 |
| 1.1.1 乳腺癌 | 第16页 |
| 1.1.2 TGF-β超家族信号通路 | 第16-20页 |
| 1.1.3 Nodal信号通路 | 第20-21页 |
| 1.1.4 Nodal的分子生物学结构特征 | 第21-22页 |
| 1.1.5 本研究的意义 | 第22-23页 |
| 1.2 NODAL及其受体ALK4和ALK7的国内外研究历史与现状 | 第23-28页 |
| 1.2.1 Nodal在国内外研究历史与现状 | 第23-25页 |
| 1.2.2 ALK7的国内外研究历史与现状 | 第25-27页 |
| 1.2.3 ALK4的国内外研究历史与现状 | 第27-28页 |
| 1.3 本文的主要贡献与创新 | 第28-29页 |
| 1.4 本论文的结构安排 | 第29-30页 |
| 第二章 NODAL在乳腺癌中的表达、功能和临床意义 | 第30-52页 |
| 2.1 前言 | 第30页 |
| 2.2 材料与方法 | 第30-37页 |
| 2.2.1 实验材料 | 第30-31页 |
| 2.2.2 细胞株及培养条件 | 第31页 |
| 2.2.3 转染实验 | 第31页 |
| 2.2.4 组织样本 | 第31-32页 |
| 2.2.5 免疫组化染色及结果评价 | 第32-33页 |
| 2.2.6 真核表达载体构建 | 第33-35页 |
| 2.2.7 稳定表达Nodal基因细胞系的建立 | 第35页 |
| 2.2.8 Western Blotting检测 | 第35-36页 |
| 2.2.9 明胶酶谱分析 | 第36页 |
| 2.2.10细胞增殖活性检测 | 第36页 |
| 2.2.11细胞迁移实验 | 第36页 |
| 2.2.12肿瘤细胞侵袭实验 | 第36-37页 |
| 2.2.13统计学方法 | 第37页 |
| 2.3 结果 | 第37-45页 |
| 2.3.1 Nodal在浸润性导管癌中高表达 | 第37-39页 |
| 2.3.2 乳腺癌组织中Nodal表达与临床病理学指标之间的关系 | 第39页 |
| 2.3.3 Nodal在浸润性导管癌中表达高于配对淋巴结转移组织 | 第39-40页 |
| 2.3.4 Nodal促进乳腺癌细胞上皮–间质转化 | 第40页 |
| 2.3.5 阻断Nodal信号通路可抑制乳腺癌细胞生长和侵袭 | 第40-42页 |
| 2.3.6 阻断Nodal信号通路后乳腺癌细胞侵袭性的改变可能与MMP-2 相关 | 第42-45页 |
| 2.4 讨论 | 第45-51页 |
| 2.4.1 Nodal表达与乳腺癌的进展相关 | 第45-48页 |
| 2.4.2 Nodal可促进乳腺癌细胞上皮–间质转化 | 第48页 |
| 2.4.3 Nodal分子是乳腺癌治疗的潜在靶点 | 第48-49页 |
| 2.4.4 SB-431542通过阻断Nodal信号通路可抑制乳腺癌细胞的侵袭性 | 第49-51页 |
| 2.5 本章小结 | 第51-52页 |
| 第三章 ALK7在乳腺癌中的表达、功能和临床意义 | 第52-65页 |
| 3.1 前言 | 第52页 |
| 3.2 材料与方法 | 第52-55页 |
| 3.2.1 实验材料 | 第52-53页 |
| 3.2.2 细胞培养及转染实验 | 第53页 |
| 3.2.3 组织样本 | 第53页 |
| 3.2.4 免疫组化染色及结果评价 | 第53-54页 |
| 3.2.5 ALK7真核表达质粒构建和基因定点突变 | 第54页 |
| 3.2.6 细胞生长测定 | 第54-55页 |
| 3.2.7 Western Blotting | 第55页 |
| 3.2.8 统计方法 | 第55页 |
| 3.3 结果 | 第55-61页 |
| 3.3.1 ALK7在导管原位癌、浸润性导管癌和淋巴结组织中表达下调 | 第55-57页 |
| 3.3.2 ALK7在浸润性导管中表达明显低于相邻的导管原位癌 | 第57-58页 |
| 3.3.3 ALK7在浸润性乳腺癌的中表达与临床病理指标的关系 | 第58-59页 |
| 3.3.4 ALK7在原发性浸润性导管癌和配对淋巴结转移中表达基本一致 | 第59-60页 |
| 3.3.5 Activin B通过ALK7可抑制乳腺癌细胞的增殖 | 第60-61页 |
| 3.4 讨论 | 第61-64页 |
| 3.4.1 ALK7在乳腺癌组织中的表达特征 | 第61-62页 |
| 3.4.2 ALK7在乳腺癌组织中表达下调与乳腺癌进展相关 | 第62-63页 |
| 3.4.3 在乳腺癌细胞中表达ALK7可恢复Activin B对细胞生长的抑制作用 | 第63-64页 |
| 3.5 本章小结 | 第64-65页 |
| 第四章 ALK4在乳腺癌中的表达、临床意义和敲除ALK4基因的TALEN质粒构建 | 第65-84页 |
| 4.1 前言 | 第65-67页 |
| 4.2 材料与方法 | 第67-71页 |
| 4.2.1 实验材料 | 第67页 |
| 4.2.2 组织样本 | 第67-68页 |
| 4.2.3 免疫组织化学及结果评价 | 第68页 |
| 4.2.4 确定ALK4基因的靶位点及识别序列设计 | 第68页 |
| 4.2.5 根据设计识别序列构建质粒 | 第68-69页 |
| 4.2.6 酶切鉴定 | 第69页 |
| 4.2.7 BLAST（Basic Local Alignment Search Tool）比对 | 第69-70页 |
| 4.2.8 转染TALEN表达质粒 | 第70页 |
| 4.2.9 PCR扩增 | 第70-71页 |
| 4.2.10 Western Blotting | 第71页 |
| 4.2.11统计方法 | 第71页 |
| 4.3 结果 | 第71-79页 |
| 4.3.1 ALK4在浸润性导管癌和淋巴结转移组织中表达降低 | 第71页 |
| 4.3.2 ALK4在浸润性乳腺癌的中表达与临床病理指标的关系 | 第71-73页 |
| 4.3.3 ALK4在原发性浸润性导管癌和配对淋巴结转移中表达基本一致 | 第73页 |
| 4.3.4 用于敲除ALK4基因的TALEN质粒构建 | 第73-78页 |
| 4.3.5 TALEN表达质粒活性鉴定 | 第78-79页 |
| 4.4 讨论 | 第79-83页 |
| 4.4.1 ALK4表达降低与乳腺癌的进展相关 | 第79-81页 |
| 4.4.2 基因敲除技术比较 | 第81-82页 |
| 4.4.3 敲除ALK4基因的TALEN质粒构建 | 第82-83页 |
| 4.5 本章小结 | 第83-84页 |
| 第五章 NODAL及其受体ALK7和ALK4在乳腺癌中的表达关系 | 第84-91页 |
| 5.1 前言 | 第84页 |
| 5.2 材料与方法 | 第84页 |
| 5.2.1 实验材料 | 第84页 |
| 5.2.2 实验方法 | 第84页 |
| 5.2.3 统计学方法 | 第84页 |
| 5.3 结果 | 第84-88页 |
| 5.3.1 Nodal及其受体ALK7和ALK4在乳腺组织中的不同表达模式 | 第84-86页 |
| 5.3.2 Nodal及其受体ALK7和ALK4在导管原位癌中的表达相关性 | 第86-87页 |
| 5.3.3 Nodal及其受体ALK7和ALK4在浸润性导管癌中的表达相关性 | 第87页 |
| 5.3.4 Nodal及其受体ALK7和ALK4在淋巴结转移中的表达相关性 | 第87-88页 |
| 5.4 讨论 | 第88-90页 |
| 5.5 本章小结 | 第90-91页 |
| 第六章 全文总结与展望 | 第91-95页 |
| 6.1 全文总结 | 第91-93页 |
| 6.2 后续工作展望 | 第93-95页 |
| 致谢 | 第95-97页 |
| 参考文献 | 第97-111页 |
| 攻读博士学位期间取得的成果 | 第111-112页 |
