| 摘要 | 第5-7页 |
| Abstract | 第7-8页 |
| 第一章 绪论 | 第12-32页 |
| 1.1 线粒体基因组与线粒体疾病 | 第12-15页 |
| 1.1.1 线粒体基因组 | 第13-14页 |
| 1.1.2 线粒体DNA突变致病的特征 | 第14-15页 |
| 1.2 耳聋的遗传特征 | 第15-16页 |
| 1.2.1 耳聋及分类 | 第15页 |
| 1.2.2 耳聋的遗传方式 | 第15-16页 |
| 1.3 耳聋与线粒体DNA突变 | 第16-25页 |
| 1.3.1 与非综合征型耳聋相关的线粒体12S rRNA突变 | 第17-19页 |
| 1.3.2 与非综合征型耳聋相关的线粒体tRNA突变 | 第19-25页 |
| 1.4 线粒体DNA突变与线粒体质量控制 | 第25-27页 |
| 1.4.1 线粒体分裂与融合 | 第25-26页 |
| 1.4.2 线粒体自噬 | 第26-27页 |
| 1.5 线粒体DNA突变的致聋机制 | 第27-29页 |
| 1.6 立题背景 | 第29-32页 |
| 第二章 研究内容及方法 | 第32-67页 |
| 2.1 研究对象 | 第32页 |
| 2.2 研究内容 | 第32-33页 |
| 2.3 实验材料 | 第33-34页 |
| 2.3.1 细胞 | 第33-34页 |
| 2.3.2 主要试剂 | 第34页 |
| 2.3.3 主要仪器 | 第34页 |
| 2.4 DNA、RNA相关实验和方法 | 第34-48页 |
| 2.4.1 基因组DNA的提取 | 第34-36页 |
| 2.4.2 线粒体DNA序列测定 | 第36页 |
| 2.4.3 PCR-RFLP检测m.12201T>C突变位点 | 第36-38页 |
| 2.4.4 焦磷酸测序技术 | 第38-41页 |
| 2.4.5 荧光定量PCR检测线粒体DNA拷贝数 | 第41-42页 |
| 2.4.6 线粒体提取 | 第42-44页 |
| 2.4.7 细胞及线粒体RNA提取 | 第44-45页 |
| 2.4.8 Northern杂交分析线粒体tRNA水平 | 第45-47页 |
| 2.4.9 Northern杂交分析线粒体tRNA氨酰化水平 | 第47-48页 |
| 2.5 细胞相关实验和方法 | 第48-61页 |
| 2.5.1 细胞培养 | 第48-49页 |
| 2.5.2 构建永生化淋巴细胞系 | 第49页 |
| 2.5.3 构建转线粒体融合细胞系 | 第49-52页 |
| 2.5.4 MTS法检测细胞增殖 | 第52-53页 |
| 2.5.5 细胞氧耗速率测定 | 第53-56页 |
| 2.5.6 细胞ATP产量的检测 | 第56-58页 |
| 2.5.7 线粒体膜电位检测 | 第58-60页 |
| 2.5.8 细胞ROS检测 | 第60-61页 |
| 2.6 蛋白质相关实验和方法 | 第61-67页 |
| 2.6.1 Western Blotting | 第61-64页 |
| 2.6.2 免疫荧光检测及激光共聚焦显微镜的使用 | 第64-66页 |
| 2.6.3 细胞自噬的调控及活性检测 | 第66-67页 |
| 第三章 结果与讨论 | 第67-93页 |
| 3.1 永生化淋巴细胞系的构建及线粒体呼吸功能检测 | 第67-73页 |
| 3.1.1 永生化淋巴细胞系的构建 | 第67页 |
| 3.1.2 线粒体DNA全序列分析 | 第67-69页 |
| 3.1.3 永生化淋巴细胞系m.12201T>C突变异质性检测 | 第69-70页 |
| 3.1.4 携带m.12201T>C突变的永生化淋巴细胞系氧耗速率降低 | 第70-73页 |
| 3.2 转线粒体细胞系的构建及细胞功能检测 | 第73-83页 |
| 3.2.1 转线粒体细胞系的构建及鉴定 | 第73-75页 |
| 3.2.2 携带m.12201T>C突变的转线粒体细胞系的线粒体tRNA水平显著降低 | 第75-76页 |
| 3.2.3 m.12201T>C突变改变了转线粒体细胞系线粒体tRNA氨酰化水平 | 第76-77页 |
| 3.2.4 m.12201T>C突变造成线粒体蛋白合成缺陷 | 第77-79页 |
| 3.2.5 携带m.12201T>C突变的转线粒体细胞系出现呼吸缺陷 | 第79-81页 |
| 3.2.6 m.12201T>C突变降低了转线粒体细胞系的ATP产量 | 第81-82页 |
| 3.2.7 携带m.12201T>C突变的转线粒体细胞系的线粒体膜电位下降 | 第82-83页 |
| 3.2.8 携带m.12201T>C突变的转线粒体细胞系的ROS产生增加 | 第83页 |
| 3.3 携带m.12201T>C突变的转线粒体细胞系的自噬状态分析 | 第83-88页 |
| 3.3.1 m.12201T>C突变降低了细胞及线粒体自噬水平 | 第83-85页 |
| 3.3.2 携带m.12201T>C突变的转线粒体细胞系的线粒体自噬速率加快 | 第85-86页 |
| 3.3.3 PINK1和Parkin参与了m.12201T>C突变转线粒体细胞系的线粒体自噬 | 第86-88页 |
| 3.4 讨论 | 第88-93页 |
| 3.4.1 线粒体tRNA~(His)12201T>C突变导致线粒体功能缺陷 | 第88-90页 |
| 3.4.2 线粒体tRNA~(His)12201T>C突变改变了线粒体自噬状态 | 第90-91页 |
| 3.4.3 总结 | 第91-93页 |
| 参考文献 | 第93-101页 |
| 附录Ⅰ：主要试剂的配制方法 | 第101-105页 |
| 附录Ⅱ：英文缩略词 | 第105-106页 |
| 攻读博士学位期间主要的研究成果 | 第106-107页 |
| 致谢 | 第107页 |
