| 摘要 | 第5-7页 |
| Abstract | 第7-9页 |
| 英文缩略词表 | 第13-14页 |
| 第一章 绪论 | 第14-33页 |
| 1.1 纤维素酶 | 第14-15页 |
| 1.2 纤维小体 | 第15-25页 |
| 1.2.1 纤维素结合模块（CBM）或纤维素结合域（CBD） | 第16-17页 |
| 1.2.2 纤维素酶的催化域 | 第17-19页 |
| 1.2.3 脚手架蛋白（Scaffoldin 或 Scaffolding Protein） | 第19-20页 |
| 1.2.4 粘连蛋白（Cohesin）与对接蛋白（Dockerin） | 第20-22页 |
| 1.2.5 纤维小体的酶单元 | 第22-24页 |
| 1.2.6 纤维小体的表达调控 | 第24-25页 |
| 1.3 毕赤酵母表达系统及其表面展示系统 | 第25-27页 |
| 1.3.1 毕赤酵母表达系统 | 第25-26页 |
| 1.3.2 毕赤酵母表面展示系统 | 第26-27页 |
| 1.4 表面展示纤维小体的研究进展 | 第27-28页 |
| 1.5 本项目的研究内容与研究意义 | 第28-33页 |
| 1.5.1 本论文的研究意义 | 第28-29页 |
| 1.5.2 本论文的研究内容 | 第29-33页 |
| 第二章 融合蛋白E4SD及脚手架蛋白CipA的克隆表达与纯化和微型纤维小体的体外装配 | 第33-60页 |
| 2.1 简介 | 第33页 |
| 2.2 仪器与材料 | 第33-41页 |
| 2.2.1 仪器 | 第33-34页 |
| 2.2.2 质粒与菌株 | 第34页 |
| 2.2.3 试剂、分子克隆工具酶与耗材 | 第34-35页 |
| 2.2.4 培养基与溶液 | 第35-41页 |
| 2.3 实验流程 | 第41-42页 |
| 2.4 实验方法 | 第42-49页 |
| 2.4.1 丙酮丁醇梭菌基因组的提取 | 第42-43页 |
| 2.4.2 大肠杆菌感受态细胞的制备 | 第43页 |
| 2.4.3 质粒转化 | 第43页 |
| 2.4.4 质粒的少量提取 | 第43-44页 |
| 2.4.5 琼脂糖凝胶电泳 | 第44-45页 |
| 2.4.6 酶切质粒或 PCR 产物 | 第45页 |
| 2.4.7 酶切产物的连接 | 第45页 |
| 2.4.8 PCR 体系与步骤 | 第45-46页 |
| 2.4.9 目的蛋白在大肠杆菌中的诱导表达 | 第46页 |
| 2.4.10 亲和层析纯化蛋白质 | 第46-47页 |
| 2.4.11 蛋白的检测 | 第47页 |
| 2.4.12 蛋白质互相作用的检测 | 第47-48页 |
| 2.4.13 酶活力的测定 | 第48-49页 |
| 2.5 实验结果 | 第49-58页 |
| 2.5.1 脚手架蛋白基因 cipA 的克隆 | 第49-50页 |
| 2.5.2 重组纤维素酶 E4SD 的克隆与构建 | 第50-56页 |
| 2.5.3 脚手架蛋白 miniCipA 与重组蛋白 E4SD 的表达、纯化和纤维小体的组装 | 第56-57页 |
| 2.5.4 纤维素酶酶活力的测定 | 第57-58页 |
| 2.6 本章小结 | 第58-60页 |
| 第三章 白蚁纤维素酶 NtEG 参与纤维小体组装的研究 | 第60-82页 |
| 3.1 简介 | 第60-61页 |
| 3.2 仪器与材料 | 第61-69页 |
| 3.2.1 仪器 | 第61-62页 |
| 3.2.2 质粒与菌株 | 第62页 |
| 3.2.3 试剂、分子克隆工具酶与耗材 | 第62-63页 |
| 3.2.4 培养基与溶液 | 第63-69页 |
| 3.3 实验流程 | 第69页 |
| 3.4 实验方法 | 第69-72页 |
| 3.4.1 目的基因的获得与拼接、克隆 | 第69-70页 |
| 3.4.2 目的基因在毕赤酵母的组成型表达 | 第70-72页 |
| 3.5 实验结果 | 第72-80页 |
| 3.5.1 NtEGD 融合蛋白三维空间结构的模拟与评估 | 第72-77页 |
| 3.5.2 NtEGD 基因片段的获得 | 第77-78页 |
| 3.5.3 质粒 pGND 的获得 | 第78页 |
| 3.5.4 毕赤酵母 X33-Gap-ND 转化子的鉴定 | 第78-79页 |
| 3.5.5 NtEGD 蛋白纤维素酶活的测定 | 第79-80页 |
| 3.6 本章小结 | 第80-82页 |
| 第四章 丙酮丁醇梭菌脚手架蛋白 CipA 在毕赤酵母 X33 的表面展示 | 第82-104页 |
| 4.1 引言 | 第82页 |
| 4.2 材料与设备 | 第82-90页 |
| 4.2.1 设备 | 第82-83页 |
| 4.2.2 质粒与菌株 | 第83页 |
| 4.2.3 试剂、分子克隆工具酶与耗材 | 第83-85页 |
| 4.2.4 培养基与溶液 | 第85-90页 |
| 4.3 实验流程 | 第90-91页 |
| 4.4 实验方法 | 第91-95页 |
| 4.4.1 目的基因的获得与拼接、克隆 | 第91-92页 |
| 4.4.2 目的基因在毕赤酵母的组成型表达 | 第92-95页 |
| 4.4.3 表面展示纤维小体的组装 | 第95页 |
| 4.4.4 表面展示纤维小体的纤维素酶活的测定 | 第95页 |
| 4.5 实验结果 | 第95-102页 |
| 4.5.1 含目的蛋白基因片段的毕赤酵母表面展示载体构建与转化 | 第95-96页 |
| 4.5.2 融合蛋白在毕赤酵母细胞表面的展示 | 第96-97页 |
| 4.5.3 目的融合蛋白在毕赤酵母细胞表面的 Western blotting 检测 | 第97-98页 |
| 4.5.4 融合蛋白 FSCipA 上的纤维素结合单元活性的检测 | 第98-99页 |
| 4.5.5 融合蛋白 FSCipA 上的粘连蛋白活性的检测 | 第99-100页 |
| 4.5.6 表面展示纤维小体纤维素酶活的检测 | 第100-102页 |
| 4.6 本章小结 | 第102-104页 |
| 结论与展望 | 第104-108页 |
| 结论 | 第104-105页 |
| 本研究的创新之处 | 第105页 |
| 讨论与展望 | 第105-108页 |
| 参考文献 | 第108-118页 |
| 攻读博士学位期间取得的研究成果 | 第118-119页 |
| 致谢 | 第119页 |
