| 摘要 | 第3-5页 |
| Abstract | 第5-6页 |
| 目录 | 第7-10页 |
| 第1章 引言 | 第10-22页 |
| 1.1 基因治疗 | 第10-12页 |
| 1.1.1 基因载体 | 第10-11页 |
| 1.1.2 基因治疗研究现状 | 第11页 |
| 1.1.3 基因治疗的应用障碍及应对策略 | 第11-12页 |
| 1.2 肝纤维化与基因治疗 | 第12-13页 |
| 1.2.1 肝纤维化概述 | 第12页 |
| 1.2.2 抗肝纤维化治疗现状 | 第12-13页 |
| 1.3 rAAV 与基因治疗 | 第13-17页 |
| 1.3.1 AAV 与 rAAV 载体 | 第13-14页 |
| 1.3.2 rAAV 载体的转染过程 | 第14页 |
| 1.3.3 rAAV 基因药物的临床应用 | 第14-15页 |
| 1.3.4 rAAV 基因药物存在的问题 | 第15页 |
| 1.3.5 rAAV 载体表达效率优化策略 | 第15-17页 |
| 1.4 RNAi 与基因治疗 | 第17-21页 |
| 1.4.1 RNAi 与 miRNA | 第17-18页 |
| 1.4.2 miRNA 与病毒感染 | 第18-21页 |
| 1.5 本课题的研究思路和论文结构安排 | 第21-22页 |
| 第2章 促进 rAAV 表达效率的 miRNA 的筛选 | 第22-46页 |
| 2.1 实验材料、试剂与仪器 | 第22-24页 |
| 2.1.1 实验材料 | 第22页 |
| 2.1.2 实验试剂与耗材 | 第22-23页 |
| 2.1.3 主要实验仪器 | 第23-24页 |
| 2.2 实验方法 | 第24-27页 |
| 2.2.1 主要溶液的配制 | 第24-25页 |
| 2.2.2 细胞复苏、冻存、培养与传代 | 第25-26页 |
| 2.2.3 转染 miRNA | 第26页 |
| 2.2.4 rAAV 病毒转染 | 第26页 |
| 2.2.5 rAAV2‐Gluc 荧光检测 | 第26-27页 |
| 2.2.6 rAAV2‐EGFP 荧光检测 | 第27页 |
| 2.2.7 MTT 法检测细胞存活率 | 第27页 |
| 2.3 实验结果及分析 | 第27-43页 |
| 2.3.1 促进 rAAV 载体表达的 miRNA 的筛选 | 第27-41页 |
| 2.3.2 对明星 miRNA 序列进行再次筛选 | 第41-43页 |
| 2.4 讨论与小结 | 第43-46页 |
| 第3章 影响 rAAV 表达的细胞信号通路预测与分析 | 第46-72页 |
| 3.1 实验材料、试剂与仪器 | 第46-47页 |
| 3.1.1 实验材料 | 第46-47页 |
| 3.1.2 实验试剂与耗材 | 第47页 |
| 3.1.3 主要实验仪器 | 第47页 |
| 3.2 实验方法 | 第47-54页 |
| 3.2.1 miRNA 靶基因的预测 | 第47-51页 |
| 3.2.2 基因富集分析 | 第51页 |
| 3.2.3 信号通路分析 | 第51页 |
| 3.2.4 主要溶液的配制 | 第51页 |
| 3.2.5 细胞复苏、冻存、培养与传代 | 第51页 |
| 3.2.6 转染 miRNA | 第51-52页 |
| 3.2.7 Trizol 法提取细胞总 RNA | 第52页 |
| 3.2.8 琼脂糖电泳鉴定细胞总 RNA | 第52-53页 |
| 3.2.9 实时荧光定量 PCR 分析（qReal‐time PCR） | 第53-54页 |
| 3.3 实验结果 | 第54-68页 |
| 3.3.1 miRNA 靶基因预测及信号通路预测 | 第54-60页 |
| 3.3.2 基因富集分析 | 第60-66页 |
| 3.3.3 琼脂糖电泳鉴定细胞总 RNA | 第66-67页 |
| 3.3.4 实时荧光定量 PCR 分析（qReal‐time PCR） | 第67-68页 |
| 3.4 讨论与小结 | 第68-72页 |
| 第4章 总结与展望 | 第72-74页 |
| 4.1 总结 | 第72页 |
| 4.2 展望 | 第72-74页 |
| 创新点 | 第74-76页 |
| 参考文献 | 第76-86页 |
| 致谢 | 第86-88页 |
| 附录 A 初筛 miRNA 文库的实验结果 | 第88-134页 |
| 附录 B 备选 miRNA 预测靶基因 GO 分类的层次网络 | 第134-138页 |
| 个人简历、在学期间发表的学术论文与研究成果 | 第138页 |
