| 摘要 | 第5-6页 |
| Abstract | 第6页 |
| 目录 | 第8-11页 |
| 第1章 绪论 | 第11-24页 |
| 1.1 脂肪酸β氧化简介 | 第13-15页 |
| 1.2 脂酰辅酶 A 脱氢酶（Acyl-CoA Dehydrogenase） | 第15-18页 |
| 1.2.1 脂酰辅酶 A 脱氢酶介绍 | 第15-16页 |
| 1.2.2 脂酰辅酶 A 脱氢酶的分类 | 第16-17页 |
| 1.2.3 脂酰辅酶 A 脱氢酶的结构 | 第17-18页 |
| 1.3 脂肪酸氧化缺陷 | 第18-22页 |
| 1.3.1 不同代谢缺陷 | 第18-20页 |
| 1.3.2 诊断及辅助检查 | 第20-21页 |
| 1.3.3 治疗进展 | 第21-22页 |
| 1.4 课题研究目的与内容 | 第22-24页 |
| 1.4.1 研究目的 | 第22页 |
| 1.4.2 研究的主要内容 | 第22-24页 |
| 第2章 实验材料与方法 | 第24-34页 |
| 2.1 实验材料 | 第24-27页 |
| 2.1.1 菌种 | 第24页 |
| 2.1.2 培养基 | 第24页 |
| 2.1.3 提取质粒试剂 | 第24页 |
| 2.1.4 琼脂糖凝胶电泳 | 第24-25页 |
| 2.1.5 回收胶试剂 | 第25页 |
| 2.1.6 不连续 SDS-PAGE 电泳 | 第25-26页 |
| 2.1.7 SDS-PAGE 胶保存装置及试剂 | 第26页 |
| 2.1.8 蛋白质亲和纯化试剂 | 第26页 |
| 2.1.9 实验的仪器与设备 | 第26-27页 |
| 2.2 实验方法 | 第27-32页 |
| 2.2.1 PCR 扩增 | 第27-28页 |
| 2.2.2 酶切 PCR 产物以及载体 pLM 1 | 第28页 |
| 2.2.3 目的片段与载体的连接 | 第28-29页 |
| 2.2.4 转化 | 第29页 |
| 2.2.5 阳性克隆筛选 | 第29页 |
| 2.2.6 蛋白质的转化 | 第29-30页 |
| 2.2.7 蛋白质的表达条件 | 第30页 |
| 2.2.8 SDS-PAGE 电泳 | 第30-31页 |
| 2.2.9 蛋白质纯化 | 第31-32页 |
| 2.3 定点突变 | 第32-33页 |
| 2.3.1 引物设计 | 第32页 |
| 2.3.2 PCR 扩增 | 第32页 |
| 2.3.3 阳性克隆筛选 | 第32-33页 |
| 2.3.4 突变蛋白的表达以及纯化 | 第33页 |
| 2.4 分析测试方法 | 第33-34页 |
| 2.4.1 SDS-PAGE 电泳 | 第33页 |
| 2.4.2 紫外可见分光光度计（UV Scanning） | 第33页 |
| 2.4.3 蛋白的活性测试 | 第33页 |
| 2.4.4 分子结构模拟（Molecular structure modeling） | 第33-34页 |
| 第3章 长链脂酰辅酶 A 脱氢酶的表达及纯化 | 第34-41页 |
| 3.1 LCAD 基因的克隆 | 第34-35页 |
| 3.1.1 LCAD 基因的克隆 | 第34页 |
| 3.1.2 阳性克隆的筛选 | 第34-35页 |
| 3.2 LCAD 蛋白质的表达 | 第35-39页 |
| 3.2.1 LCAD 蛋白质的表达的条件确定 | 第35页 |
| 3.2.2 LCAD 蛋白大规模表达 | 第35-36页 |
| 3.2.3 SDS-PAGE 分析 LCAD | 第36页 |
| 3.2.4 UV/Vis 分析 LCAD 蛋白 | 第36-37页 |
| 3.2.5 分子模拟 LCAD | 第37-39页 |
| 3.2.6 活性测定 | 第39页 |
| 3.3 本章小结 | 第39-41页 |
| 第4章 脂酰辅酶 A 脱氢酶 9 的表达、纯化及 E389 定点突变 | 第41-50页 |
| 4.1 ACAD9 基因的克隆 | 第41-43页 |
| 4.1.1 ACAD9 基因的克隆 | 第41-42页 |
| 4.1.2 阳性克隆的筛选 | 第42-43页 |
| 4.2 ACAD9 蛋白质的表达 | 第43-46页 |
| 4.2.1 ACAD9 蛋白质表达的条件确定 | 第43页 |
| 4.2.2 ACAD9 蛋白大规模表达 | 第43页 |
| 4.2.3 SDS-PAGE 分析 ACAD9 | 第43-44页 |
| 4.2.4 UV/Vis 分析 ACAD9 蛋白 | 第44页 |
| 4.2.5 分子模拟 ACAD9 | 第44-46页 |
| 4.3 ACAD9 蛋白 E389 定点突变 | 第46-48页 |
| 4.3.1 ACAD9 蛋白定点突变 | 第46页 |
| 4.3.2 突变体蛋白质的表达及纯化 | 第46页 |
| 4.3.3 突变体蛋白的 SDS-PAGE 电泳 | 第46-47页 |
| 4.3.4 UV/Vis 分析 ACAD9 突变体蛋白 | 第47页 |
| 4.3.5 活性测定 | 第47-48页 |
| 4.3.6 动力学参数测定 | 第48页 |
| 4.4 本章小结 | 第48-50页 |
| 结论 | 第50-55页 |
| 参考文献 | 第55-64页 |
| 附录一 本文所用英文缩写词表 | 第64-65页 |
| 致谢 | 第65页 |
