| 摘要 | 第7-9页 |
| ABSTRACT | 第9-11页 |
| 縮略词表 | 第12-14页 |
| 第一章 绪论 | 第14-28页 |
| 1.1 木质纤维素及其降解酶系 | 第14-16页 |
| 1.2 木质素降解酶——漆酶 | 第16-22页 |
| 1.2.1 漆酶的概述 | 第16-17页 |
| 1.2.2 漆酶的结构和功能 | 第17-19页 |
| 1.2.3 漆酶的基因家族及异源表达进展 | 第19-21页 |
| 1.2.4 Trametes sp.AH28-2菌株的漆酶 | 第21-22页 |
| 1.3 丝状真菌基因表达系统 | 第22-25页 |
| 1.3.1 丝状真菌表达系统概述 | 第22-23页 |
| 1.3.2 瑞氏木霉概述 | 第23-25页 |
| 1.4 本论文研究意义和主要内容 | 第25-28页 |
| 第二章 利用随机整合策略在瑞氏木霉中异源表达栓菌漆酶LacA的研究 | 第28-62页 |
| 2.1 材料与方法 | 第28-43页 |
| 2.1.1 菌株和质粒 | 第28页 |
| 2.1.2 PCR引物 | 第28-30页 |
| 2.1.3 主要实验仪器和试剂 | 第30页 |
| 2.1.4 主要培养基及培养条件 | 第30-32页 |
| 2.1.5 分子生物学操作方法 | 第32-37页 |
| 2.1.6 漆酶LacA表达载体pCGTLacA的构建 | 第37-40页 |
| 2.1.7 随机整合策略Pcbh1-lacA-pyrG表达盒构建 | 第40-41页 |
| 2.1.8 瑞氏木霉的遗传转化 | 第41页 |
| 2.1.9 转化子的筛选鉴定 | 第41-42页 |
| 2.1.10 菌株的培养发酵及活力分析 | 第42-43页 |
| 2.1.11 生物信息学软件及分析 | 第43页 |
| 2.2 结果与分析 | 第43-60页 |
| 2.2.1 Trametes sp.AH28-2菌株漆酶LacA序列分析 | 第43-46页 |
| 2.2.2 漆酶表达载体pCGTLacA的构建 | 第46-53页 |
| 2.2.3 Pcbhl-lacA-pyrG表达盒的构建结果 | 第53页 |
| 2.2.4 转化子的筛选鉴定 | 第53-56页 |
| 2.2.5 菌株的培养发酵及活力分析 | 第56-58页 |
| 2.2.6 qPCR检测lacA基因、UPR及ERAD途径相关因子的表达水平分析 | 第58-60页 |
| 2.3 小结 | 第60-62页 |
| 第三章 栓菌漆酶lacA置换瑞氏木霉cbhl表达研究 | 第62-84页 |
| 3.1 材料与方法 | 第62-65页 |
| 3.1.1 菌株与质粒 | 第62-63页 |
| 3.1.2 PCR引物 | 第63页 |
| 3.1.3 主要培养基及培养条件 | 第63页 |
| 3.1.4 主要实验仪器和试剂 | 第63页 |
| 3.1.5 分子生物学操作方法 | 第63-64页 |
| 3.1.6 Pcbh1-lacA-pyrG-Tcbh1表达盒的构建 | 第64页 |
| 3.1.7 Pcbh1-lacA-pyrG-Tcbh1表达盒转化瑞氏木霉 | 第64页 |
| 3.1.8 瑞氏木霉转化子的筛选及PCR验证 | 第64-65页 |
| 3.1.9 转化子的平板显色 | 第65页 |
| 3.1.10 漆酶的诱导及活力分析 | 第65页 |
| 3.1.11 生物信息学软件及分析 | 第65页 |
| 3.2 结果与分析 | 第65-81页 |
| 3.2.1 LacA及CBH1序列及结构比较分析 | 第65-67页 |
| 3.2.2 Pcbh1-lacA-pyrG-Tcbh1表达盒的构建 | 第67页 |
| 3.2.3 瑞氏木霉的转化和漆酶表达菌株的筛选 | 第67-71页 |
| 3.2.4 转化菌株的平板显色分析 | 第71-72页 |
| 3.2.5 TLac3菌株lacA和cbhl基因及蛋白折叠分泌相关因子的转录分析 | 第72-76页 |
| 3.2.6 菌株TLac3的漆酶的诱导及活力分析 | 第76-80页 |
| 3.2.7 菌株培养及产酶条件探索 | 第80-81页 |
| 3.3 小结 | 第81-84页 |
| 全文总结 | 第84-86页 |
| 参考文献 | 第86-94页 |
| 致谢 | 第94-95页 |
| 学位论文评阅及答辩情况表 | 第95页 |
