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利用随机整合和基因置换策略在瑞氏木霉中异源表达栓菌漆酶的研究

摘要第7-9页
ABSTRACT第9-11页
縮略词表第12-14页
第一章 绪论第14-28页
    1.1 木质纤维素及其降解酶系第14-16页
    1.2 木质素降解酶——漆酶第16-22页
        1.2.1 漆酶的概述第16-17页
        1.2.2 漆酶的结构和功能第17-19页
        1.2.3 漆酶的基因家族及异源表达进展第19-21页
        1.2.4 Trametes sp.AH28-2菌株的漆酶第21-22页
    1.3 丝状真菌基因表达系统第22-25页
        1.3.1 丝状真菌表达系统概述第22-23页
        1.3.2 瑞氏木霉概述第23-25页
    1.4 本论文研究意义和主要内容第25-28页
第二章 利用随机整合策略在瑞氏木霉中异源表达栓菌漆酶LacA的研究第28-62页
    2.1 材料与方法第28-43页
        2.1.1 菌株和质粒第28页
        2.1.2 PCR引物第28-30页
        2.1.3 主要实验仪器和试剂第30页
        2.1.4 主要培养基及培养条件第30-32页
        2.1.5 分子生物学操作方法第32-37页
        2.1.6 漆酶LacA表达载体pCGTLacA的构建第37-40页
        2.1.7 随机整合策略Pcbh1-lacA-pyrG表达盒构建第40-41页
        2.1.8 瑞氏木霉的遗传转化第41页
        2.1.9 转化子的筛选鉴定第41-42页
        2.1.10 菌株的培养发酵及活力分析第42-43页
        2.1.11 生物信息学软件及分析第43页
    2.2 结果与分析第43-60页
        2.2.1 Trametes sp.AH28-2菌株漆酶LacA序列分析第43-46页
        2.2.2 漆酶表达载体pCGTLacA的构建第46-53页
        2.2.3 Pcbhl-lacA-pyrG表达盒的构建结果第53页
        2.2.4 转化子的筛选鉴定第53-56页
        2.2.5 菌株的培养发酵及活力分析第56-58页
        2.2.6 qPCR检测lacA基因、UPR及ERAD途径相关因子的表达水平分析第58-60页
    2.3 小结第60-62页
第三章 栓菌漆酶lacA置换瑞氏木霉cbhl表达研究第62-84页
    3.1 材料与方法第62-65页
        3.1.1 菌株与质粒第62-63页
        3.1.2 PCR引物第63页
        3.1.3 主要培养基及培养条件第63页
        3.1.4 主要实验仪器和试剂第63页
        3.1.5 分子生物学操作方法第63-64页
        3.1.6 Pcbh1-lacA-pyrG-Tcbh1表达盒的构建第64页
        3.1.7 Pcbh1-lacA-pyrG-Tcbh1表达盒转化瑞氏木霉第64页
        3.1.8 瑞氏木霉转化子的筛选及PCR验证第64-65页
        3.1.9 转化子的平板显色第65页
        3.1.10 漆酶的诱导及活力分析第65页
        3.1.11 生物信息学软件及分析第65页
    3.2 结果与分析第65-81页
        3.2.1 LacA及CBH1序列及结构比较分析第65-67页
        3.2.2 Pcbh1-lacA-pyrG-Tcbh1表达盒的构建第67页
        3.2.3 瑞氏木霉的转化和漆酶表达菌株的筛选第67-71页
        3.2.4 转化菌株的平板显色分析第71-72页
        3.2.5 TLac3菌株lacA和cbhl基因及蛋白折叠分泌相关因子的转录分析第72-76页
        3.2.6 菌株TLac3的漆酶的诱导及活力分析第76-80页
        3.2.7 菌株培养及产酶条件探索第80-81页
    3.3 小结第81-84页
全文总结第84-86页
参考文献第86-94页
致谢第94-95页
学位论文评阅及答辩情况表第95页

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