| 摘要 | 第4-5页 |
| Abstract | 第5-6页 |
| 1 绪论 | 第10-22页 |
| 1.1 双组分信号系统概述 | 第10-13页 |
| 1.1.1 双组分信号系统的特征 | 第11-13页 |
| 1.2 高等植物的双组分信号系统 | 第13-14页 |
| 1.2.1 细胞分裂素信号途径 | 第13-14页 |
| 1.2.2 乙烯的信号转导 | 第14页 |
| 1.2.3 光敏色素的作用与双组分信号系统 | 第14页 |
| 1.3 细胞分裂素信号转导系统 | 第14-16页 |
| 1.4 植物基因功能的研究方法 | 第16-20页 |
| 1.4.1 RNAi技术 | 第16-17页 |
| 1.4.2 基因打靶技术 | 第17-19页 |
| 1.4.3 基因捕获技术 | 第19页 |
| 1.4.4 基因芯片技术 | 第19-20页 |
| 1.4.5 生物信息学 | 第20页 |
| 1.5 酵母表达系统 | 第20-21页 |
| 1.6 实验目的和意义 | 第21-22页 |
| 2 PHK4 基因表达载体构建 | 第22-36页 |
| 2.1 实验材料 | 第22-23页 |
| 2.1.1 材料 | 第22页 |
| 2.1.2 实验试剂和药品 | 第22页 |
| 2.1.3 菌株 | 第22页 |
| 2.1.4 PCR引物 | 第22页 |
| 2.1.5 主要仪器设备 | 第22-23页 |
| 2.2 实验方法 | 第23-31页 |
| 2.2.1 PHK4基因的克隆 | 第23-27页 |
| 2.2.1.1 引物设计 | 第23页 |
| 2.2.1.2 目的片段的扩增 | 第23-24页 |
| 2.2.1.3 目的片段的回收 | 第24-25页 |
| 2.2.1.4 连接 | 第25页 |
| 2.2.1.5 转化 | 第25页 |
| 2.2.1.6 质粒的碱法提取 | 第25-26页 |
| 2.2.1.7 质粒的限制性内切核酸酶检测 | 第26-27页 |
| 2.2.1.8 测序分析 | 第27页 |
| 2.2.2 PHK4基因酵母表达载体构建 | 第27-28页 |
| 2.2.2.1 酵母表达载体的扩增 | 第27页 |
| 2.2.2.2 pMD19-T-3k(NotⅠ-SpeⅠ)和酵母表达载体pCUY315质粒DNA的提取 | 第27页 |
| 2.2.2.3 pMD19-T-3k(NotⅠ-SpeeⅠ)和酵母表达载体pCUY315质粒DNA的酶切 | 第27-28页 |
| 2.2.2.4 连接及转化 | 第28页 |
| 2.2.3 PHK4基因过表达载体构建 | 第28-31页 |
| 2.2.3.1 pMD19-T-3k(BglⅡ-SpeⅠ)和过表达载体p130035SI质粒DNA的提取 | 第28-29页 |
| 2.2.3.2 pMDl9-T-3k(BglⅡ-SpeⅠ)和过表达载体p130035SI质粒DNA的酶切 | 第29页 |
| 2.2.3.3 连接及转化 | 第29-31页 |
| 2.3 结果与分析 | 第31-33页 |
| 2.3.1 PHK4基因的克隆 | 第31页 |
| 2.3.2 酵母表达载体的扩增 | 第31-32页 |
| 2.3.3 PHK4基因酵母表达载体构建 | 第32页 |
| 2.3.4 PHK4基因过表达载体构建 | 第32-33页 |
| 2.4 小结 | 第33-36页 |
| 3 PHK4 基因功能分析 | 第36-43页 |
| 3.1 实验材料 | 第36-37页 |
| 3.1.1 植物材料 | 第36页 |
| 3.1.2 菌种 | 第36页 |
| 3.1.3 试剂 | 第36-37页 |
| 3.1.4 培养基 | 第37页 |
| 3.1.5 仪器设备 | 第37页 |
| 3.2 实验方法 | 第37-40页 |
| 3.2.1 PHK4基因转化酵母菌株的研究 | 第37-39页 |
| 3.2.1.1 质粒pCUY315-PHK4的提取 | 第37页 |
| 3.2.1.2 氨基酸溶剂配制 | 第37页 |
| 3.2.1.3 SC/-Ura、Leu培养基的配制 | 第37-38页 |
| 3.2.1.4 酵母感受态制备及转化 | 第38-39页 |
| 3.2.2 PHK4基因转化拟南芥突变体的研究 | 第39-40页 |
| 3.2.2.1 工程菌的构建 | 第39-40页 |
| 3.2.2.1.1 质粒p130035SI-PHK4的提取 | 第39页 |
| 3.2.2.1.2 根癌农杆菌感受态细胞的制备 | 第39页 |
| 3.2.2.1.3 冻融法转化 | 第39页 |
| 3.2.2.1.4 阳性菌落的检测 | 第39-40页 |
| 3.2.2.2 | 第40页 |
| 3.2.2.2.1 拟南芥播种 | 第40页 |
| 3.2.2.2.2 转化用拟南芥突变体根部的预培养 | 第40页 |
| 3.2.2.2.3 农杆菌的培养 | 第40页 |
| 3.2.2.2.4 浸染 | 第40页 |
| 3.2.2.2.5 抗性植株的筛选 | 第40页 |
| 3.3 结果与分析 | 第40-43页 |
| 3.3.1 PHK4基因转化酵母菌株的研究 | 第40-41页 |
| 3.3.2 PHK4基因转化拟南芥突变体的研究 | 第41-43页 |
| 3.3.2.1 工程菌的构建 | 第41页 |
| 3.3.2.2 拟南芥转化 | 第41-43页 |
| 4 讨论 | 第43-44页 |
| 4.1 表达载体的构建 | 第43页 |
| 4.2 酵母感受态的制备 | 第43页 |
| 4.3 叶盘转化法 | 第43-44页 |
| 结论 | 第44-45页 |
| 参考文献 | 第45-48页 |
| 附录A 附录内容名称 | 第48-49页 |
| 附录B 附录内容名称 | 第49-50页 |
| 攻读硕士学位期间发表学术论文情况 | 第50-51页 |
| 致谢 | 第51页 |
