| 摘要 | 第6-7页 |
| Abstract | 第7页 |
| 缩略语 | 第8-11页 |
| 1 文献综述 | 第11-22页 |
| 1.1 灰红链霉菌简介 | 第11页 |
| 1.2 初级代谢与次级代谢 | 第11-12页 |
| 1.3 化合物的筛选策略 | 第12-13页 |
| 1.4 微生物基因组文库的构建方法 | 第13-14页 |
| 1.5 基于基因组文库的次级代谢产物的克隆方法 | 第14-16页 |
| 1.6 异源表达理想的宿主 | 第16-18页 |
| 1.7 微生物限制修饰系统 | 第18-19页 |
| 1.7.1 大肠杆菌中的甲基化系统 | 第18页 |
| 1.7.2 链霉菌中的限制系统 | 第18页 |
| 1.7.3 原生质体转化和接合转移 | 第18-19页 |
| 1.8 接合转移供体大肠杆菌 | 第19-20页 |
| 1.9 本研究的意义 | 第20-22页 |
| 2 材料与方法 | 第22-40页 |
| 2.1 菌株 | 第22-23页 |
| 2.2 质粒 | 第23页 |
| 2.3 引物 | 第23-24页 |
| 2.4 培养基和生化试剂 | 第24-27页 |
| 2.5 实验方法 | 第27-40页 |
| 2.5.1 链霉菌培养及菌种保藏 | 第27页 |
| 2.5.2 大肠杆菌质粒DNA的小量提取方法 | 第27-28页 |
| 2.5.3 大肠杆菌质粒DNA的少量快速提取及检测 | 第28页 |
| 2.5.4 链霉菌总DNA的大量提取方法 | 第28页 |
| 2.5.5 苯酚/氯仿纯化DNA的方法 | 第28-29页 |
| 2.5.6 聚合酶链式反应PCR及TA克隆 | 第29-30页 |
| 2.5.7 DNA片段的回收 | 第30-31页 |
| 2.5.8 DNA的酶切反应 | 第31页 |
| 2.5.9 DNA的去磷酸化处理 | 第31页 |
| 2.5.10 DNA的连接反应 | 第31-32页 |
| 2.5.11 大肠杆菌CaCl_2感受态的制备及转化 | 第32页 |
| 2.5.12 大肠杆菌电转化感受态的制备及电转化 | 第32-33页 |
| 2.5.13 大肠杆菌和链霉菌的两亲本属间的接合转移 | 第33页 |
| 2.5.14 Cosmid基因组文库的构建 | 第33-37页 |
| 2.5.15 Cosmid文库高通量接合转移 | 第37-38页 |
| 2.5.16 大批量生物活性测定 | 第38-40页 |
| 3 结果与分析 | 第40-55页 |
| 3.1 构建灰红链霉菌AL7 cosmid基因组文库的大肠杆菌宿主 | 第40-42页 |
| 3.2 构建高质量的灰红链霉菌AL7 cosmid基因组文库 | 第42-44页 |
| 3.3 大质粒在表达宿主中的完整表达率 | 第44-45页 |
| 3.4 构建异源表达文库 | 第45-47页 |
| 3.5 生物活性测定筛选表达文库 | 第47-50页 |
| 3.6 全基因组扫描注释 | 第50-51页 |
| 3.7 阳性cosmid末端测序定位 | 第51-53页 |
| 3.8 生物活性表型验证 | 第53-55页 |
| 4 总结 | 第55-56页 |
| 4.1 多轮脉冲电泳回收法构建高质量的cosmid基因组文库 | 第55页 |
| 4.2 高通量异源表达方法的成功应用 | 第55-56页 |
| 5 讨论 | 第56-58页 |
| 5.1 大肠杆菌LP3的优点与不足 | 第56页 |
| 5.2 高通量异源表达宿主的选择 | 第56-57页 |
| 5.3 研究展望 | 第57-58页 |
| 参考文献 | 第58-64页 |
| 致谢 | 第64-65页 |
| 攻读学位期间发表的学术论文 | 第65页 |
