| 摘要 | 第4-6页 |
| Abstract | 第6-7页 |
| 目录 | 第8-11页 |
| 1. 文献综述 | 第11-24页 |
| 1.1 细菌分泌系统(T1SS-T6SS)的简介 | 第11页 |
| 1.2 T6SS的功能简述 | 第11-15页 |
| 1.2.1 T6SS的致病作用 | 第11-13页 |
| 1.2.2 T6SS的抗致病作用 | 第13-14页 |
| 1.2.3 T6SS在细菌与细菌相互作用中的角色 | 第14-15页 |
| 1.3 T6SS基因表达的调控 | 第15-17页 |
| 1.3.1 T6SS基因表达受环境因素的调控 | 第15页 |
| 1.3.2 细菌体内调控T6SS表达的机制 | 第15-17页 |
| 1.4 T6SS目前研究的现状 | 第17-19页 |
| 1.5 ClpV型ATPase的介绍以及研究进展 | 第19-20页 |
| 1.6 模式生物简介 | 第20-21页 |
| 1.6.1 假结核耶尔森氏菌简介 | 第20页 |
| 1.6.2 根癌农杆菌C58的简介 | 第20-21页 |
| 1.7 本研究的目的和主要创新点 | 第21-23页 |
| 1.8 本论文研究路线 | 第23-24页 |
| 2. 材料与方法 | 第24-38页 |
| 2.1. 材料 | 第24-25页 |
| 2.1.1 菌株与质粒 | 第24页 |
| 2.1.2 分子生物学试剂 | 第24页 |
| 2.1.3 引物序列 | 第24页 |
| 2.1.4 主要实验仪器 | 第24-25页 |
| 2.2 方法 | 第25-38页 |
| 2.2.1 克隆构建 | 第25-27页 |
| 2.2.1.1 目的基因与载体的制备 | 第25-26页 |
| 2.2.1.2 感受态的制备及转化 | 第26-27页 |
| 2.2.1.3 重组子鉴定 | 第27页 |
| 2.2.2 定点突变 | 第27-28页 |
| 2.2.3 重组蛋白原核表达纯化及标签的切除 | 第28页 |
| 2.2.4 GST pull-down | 第28-29页 |
| 2.2.5 Western blot | 第29页 |
| 2.2.6 β-gal酶活测定 | 第29页 |
| 2.2.7 单交换菌株及缺失突变体的构建 | 第29-30页 |
| 2.2.8 酶活测定 | 第30页 |
| 2.2.9 蛋白多聚体检测法 | 第30-31页 |
| 2.2.10 蛋白多聚体检测法 | 第31页 |
| 2.2.11 电镜检测 | 第31页 |
| 2.2.12 酵母双杂交法 | 第31-38页 |
| 3 结果与分析 | 第38-63页 |
| 3.1 T6SS蛋白互作网络的构建 | 第38-43页 |
| 3.1.1 猎物克隆与饵克隆的构建 | 第38-40页 |
| 3.1.2 T6SS蛋白互作网络图的绘制 | 第40-43页 |
| 3.1.2.1 蛋白互作检测 | 第40页 |
| 3.1.2.2 蛋白互作网络 | 第40-43页 |
| 3.2 ClpV型ATPase的酶活检测 | 第43-53页 |
| 3.2.1 ClpV的结构分析 | 第43-44页 |
| 3.2.2 ClpV型ATPase及其定点突变克隆的构建和蛋白表达 | 第44-47页 |
| 3.2.2.1 clpV基因表达载体的构建 | 第44-45页 |
| 3.2.2.2 clpV基因在大肠杆菌中的表达 | 第45-46页 |
| 3.2.2.3 蛋白标签GST的切除 | 第46-47页 |
| 3.2.3 ClpV的酶学性质研究 | 第47-52页 |
| 3.2.3.1 ClpV的酶学活性的检测 | 第47-48页 |
| 3.2.3.2 盐离子浓度和pH对ClpV的酶学活性的影响 | 第48-50页 |
| 3.2.3.3 ClpV型ATPase的动力学分析 | 第50-52页 |
| 3.2.4 ClpV突变体的酶学分析 | 第52-53页 |
| 3.3 ClpV型ATPase的结构分析 | 第53-58页 |
| 3.3.1 ClpV型ATPase呈现一个多聚体 | 第54-55页 |
| 3.3.2 ClpV型ATPase呈现一个环状的六聚体状态 | 第55-56页 |
| 3.3.3 ClpV蛋白自身互作位点的分析 | 第56-58页 |
| 3.4 ClpV蛋白与Atu4341/Atu4342复合体之间的关系的研究 | 第58-61页 |
| 3.4.1 Atu4342介导ClpV蛋白与Atu4341/Atu4342复合体相互作用 | 第58页 |
| 3.4.2 ClpV蛋白依赖ATP重塑ClpV/Atu4341/Atu4342复合体 | 第58-61页 |
| 3.5 ClpV型ATPase的功能的研究 | 第61-63页 |
| 3.5.1 突变体及回复菌株的的构建 | 第61页 |
| 3.5.2 ClpV型ATPase的功能分析 | 第61-63页 |
| 4. 分析与讨论 | 第63-70页 |
| 4.1 T6SS相关蛋白的互作网络分析 | 第63页 |
| 4.2 T6SS关键组分ClpV型ATPase的酶活检测及影响因素 | 第63-64页 |
| 4.3 ClpV型ATPase呈现六聚体状态及自身互作位点的分析 | 第64-65页 |
| 4.4 ClpV型ATPase与Atu4341和Atu4342复合体之间的关系 | 第65-67页 |
| 4.5 ClpV型ATPase对Hcp分泌的影响 | 第67-68页 |
| 4.6 展望 | 第68-70页 |
| 5. 结论 | 第70-72页 |
| 参考文献 | 第72-83页 |
| 附录1 缩略语表 | 第83-85页 |
| 附录2 主要仪器设备 | 第85-86页 |
| 附录3 培养基及溶液配制 | 第86-91页 |
| 致谢 | 第91页 |
