| 摘要 | 第6-8页 |
| Abstract | 第8-9页 |
| 前言 | 第10-17页 |
| 实验材料 | 第17-24页 |
| 1. 主要化学试剂及实验材料 | 第17-18页 |
| 2. 主要仪器 | 第18-19页 |
| 3. 工具酶、相对分子质量标准及试剂盒 | 第19-20页 |
| 4. 抗体 | 第20页 |
| 5. 质粒构建载体 | 第20页 |
| 6. DNA引物和合成的小RNA | 第20-22页 |
| 7. 菌株 | 第22页 |
| 8. 细胞株 | 第22-23页 |
| 9. 细胞培养基 | 第23页 |
| 10. 人正常脑组织和神经胶质瘤样本 | 第23页 |
| 11. 软件及网络资源 | 第23-24页 |
| 实验方法 | 第24-37页 |
| 1. 组织及细胞总蛋白的提取 | 第24页 |
| 2. 蛋白质浓度测定 | 第24-25页 |
| 2.1 实验原理 | 第24页 |
| 2.2 试剂 | 第24页 |
| 2.3 实验步骤 | 第24-25页 |
| 3. Western blotting蛋白印记实验 | 第25-26页 |
| 3.1 Western-blotting杂交用液 | 第25页 |
| 3.2 Western-Blotting蛋白印迹杂交 | 第25-26页 |
| 4. 细胞总RNA的提取 | 第26-27页 |
| 5. 实时荧光定量PCR | 第27-28页 |
| 5.1 原理 | 第27页 |
| 5.2 模板的制备 | 第27-28页 |
| 5.3 实时定量PCR | 第28页 |
| 6. 克隆构建 | 第28-32页 |
| 6.1 PCR反应 | 第28-29页 |
| 6.2 PCR反应程序 | 第29页 |
| 6.3 限制性内切酶酶切反应 | 第29-30页 |
| 6.4 酶切产物回收 | 第30页 |
| 6.5 连接 | 第30页 |
| 6.6 转化 | 第30-31页 |
| 6.7 接菌 | 第31页 |
| 6.8 质粒抽提 | 第31页 |
| 6.9 酶切鉴定 | 第31页 |
| 6.10 测序及结果分析 | 第31-32页 |
| 7. 细胞培养及转染 | 第32-33页 |
| 7.1 细胞培养及传代 | 第32页 |
| 7.2 转染 | 第32-33页 |
| 8. MTT | 第33页 |
| 8.1 原理 | 第33页 |
| 8.2 MTT溶液的配制 | 第33页 |
| 8.3 操作步骤 | 第33页 |
| 9. 克隆形成实验 | 第33-34页 |
| 10. TRANSWELL细胞迁移实验 | 第34-35页 |
| 10.1 实验原理 | 第34页 |
| 10.2 实验步骤 | 第34-35页 |
| 11. 细胞划痕实验 | 第35页 |
| 11.1 实验原理 | 第35页 |
| 11.2 实验步骤 | 第35页 |
| 12. 荧光素酶报告基因实验 | 第35-36页 |
| 12.1 原理 | 第35页 |
| 12.2 细胞样品的准备 | 第35-36页 |
| 12.3 荧光素酶基因活性检测 | 第36页 |
| 13. 数据处理和分析 | 第36-37页 |
| 结果 | 第37-52页 |
| 1. 胶质瘤组织和胶质瘤细胞系中CLOCK蛋白表达检测 | 第37-39页 |
| 2. CLOCK对神经胶质瘤细胞的生长的影响 | 第39-42页 |
| 3. CLOCK对神经胶质瘤细胞的迁移的影响 | 第42-43页 |
| 4. miR-124在胶质瘤细胞中对CLOCK的靶向作用检测 | 第43-47页 |
| 5. MiR-124和CLOCK胶质瘤细胞中NF-κB的活性的影响 | 第47-52页 |
| 讨论 | 第52-57页 |
| 1. CLOCK蛋白在胶质瘤中高表达提示CLOCK可能在胶质瘤发生发展中发挥功能 | 第52页 |
| 2. 生物钟基因CLOCK在胶质瘤中发挥促进肿瘤细胞生长和迁移作用 | 第52-53页 |
| 3. 胶质瘤中miR-124的低表达是CLOCK高表达的原因 | 第53-54页 |
| 4. CLOCK对NF-κB活性的影响 | 第54-56页 |
| 5. miR-124-CLOCK-NF-κB在神经胶质瘤中的关系 | 第56-57页 |
| 小结 | 第57页 |
| 不足与展望 | 第57-58页 |
| 参考文献 | 第58-66页 |
| 论文综述 | 第66-96页 |
| 参考文献 | 第85-96页 |
| 附录 | 第96-97页 |
| 个人简历 | 第97页 |
| 论文和会议摘要 | 第97-98页 |
| 致谢 | 第98-100页 |
