| 中文摘要 | 第8-10页 |
| ABSTRACT | 第10-12页 |
| 前言 | 第13-18页 |
| 第一章 Biotin-DSPE的合成与结构鉴定 | 第18-24页 |
| 1 材料与仪器 | 第18-19页 |
| 1.1 药品与试剂 | 第18页 |
| 1.2 仪器及设备 | 第18-19页 |
| 2 试验方法 | 第19-20页 |
| 2.1 Biotin-DSPE的合成 | 第19-20页 |
| 2.1.1 Biotin-DSPE的分离纯化 | 第19-20页 |
| 2.1.2 Biotin-DSPE的定性和结构鉴别 | 第20页 |
| 3 结果与讨论 | 第20-23页 |
| 3.1 Biotin-DSPE的合成 | 第20页 |
| 3.2 Biotin-DSPE的FTIR | 第20-21页 |
| 3.3 Biotin-DSPE的~1H NMR | 第21-22页 |
| 3.4 Biotin-DSPE的TLC | 第22-23页 |
| 本章小结 | 第23-24页 |
| 第二章 胰岛素生物素化脂质体的制备与表征 | 第24-48页 |
| 1 材料与仪器 | 第24-25页 |
| 1.1 药品与试剂 | 第24-25页 |
| 1.2 仪器及设备 | 第25页 |
| 1.3 实验动物 | 第25页 |
| 2 实验方法 | 第25-31页 |
| 2.1 胰岛素HPLC分析方法的建立 | 第25-26页 |
| 2.1.1 色谱条件 | 第25-26页 |
| 2.1.2 标准曲线 | 第26页 |
| 2.1.3 精密度 | 第26页 |
| 2.1.4 准确度 | 第26页 |
| 2.1.5 专属性 | 第26页 |
| 2.2 载胰岛素生物素化脂质体的制备与表征 | 第26-28页 |
| 2.2.1 载胰岛素脂质体的制备 | 第26-27页 |
| 2.2.2 粒径的测定 | 第27页 |
| 2.2.3 包封率的测定 | 第27-28页 |
| 2.2.4 脂质体处方优化 | 第28页 |
| 2.2.5 脂质体粒径 | 第28页 |
| 2.2.6 脂质体形态 | 第28页 |
| 2.3 胰岛素的构象和生物活性 | 第28-30页 |
| 2.3.1 制备条件对胰岛素二级构象的影响 | 第29-30页 |
| 2.3.2 制备条件对胰岛素生物活性的影响 | 第30页 |
| 2.4 Biotin-DSPE用量对脂质体相变温度的影响 | 第30-31页 |
| 2.5 脂质体体外稳定性 | 第31页 |
| 2.6 脂质体贮存稳定性 | 第31页 |
| 3 结果与讨论 | 第31-47页 |
| 3.1 胰岛素测定HPLC方法 | 第31-33页 |
| 3.1.1 标准曲线 | 第31页 |
| 3.1.2 精密度 | 第31-32页 |
| 3.1.3 准确度 | 第32页 |
| 3.1.4 专属性 | 第32-33页 |
| 3.2 胰岛素脂质体的制备 | 第33-40页 |
| 3.2.1 包封率的测定 | 第33-34页 |
| 3.2.2 脂质体处方单因素考察 | 第34-37页 |
| 3.2.3 脂质体粒径及形态 | 第37-38页 |
| 3.2.4 脂质体的制备 | 第38-40页 |
| 3.3 胰岛素在脂质体中的构象和生物活性 | 第40-44页 |
| 3.3.1 脂质体中胰岛素的二级构象 | 第41-43页 |
| 3.3.2 脂质体中胰岛素的生物活性 | 第43-44页 |
| 3.4 Biotin-DSPE用量对脂质体相变温度的影响 | 第44-45页 |
| 3.5 增强的脂质体体外稳定性 | 第45-46页 |
| 3.6 脂质体贮存稳定性 | 第46-47页 |
| 本章小结 | 第47-48页 |
| 第三章 生物素化脂质体体内药效学和药动学研究 | 第48-62页 |
| 1 材料与仪器 | 第48-49页 |
| 1.1 药品与试剂 | 第48页 |
| 1.2 仪器及设备 | 第48-49页 |
| 1.3 实验动物 | 第49页 |
| 2 实验方法 | 第49-52页 |
| 2.1 胰岛素脂质体的制备 | 第49页 |
| 2.2 正常大鼠口服给药降血糖效应研究 | 第49-50页 |
| 2.2.1 血糖的测定 | 第49-50页 |
| 2.2.2 脂质体口服降血糖效应研究 | 第50页 |
| 2.3 糖尿病大鼠口服给药降血糖效应和生物利用度研究 | 第50-51页 |
| 2.4 统计分析 | 第51-52页 |
| 3 结果与讨论 | 第52-61页 |
| 3.1 脂质体粒径和包封率 | 第52页 |
| 3.2 正常大鼠口服胰岛素制剂的降血糖效应 | 第52-57页 |
| 3.2.1 脂质体粒径对降血糖效应的影响 | 第53-55页 |
| 3.2.2 配体比例对降血糖效应的影响 | 第55-56页 |
| 3.2.3 剂量对降血糖效应的影响 | 第56-57页 |
| 3.3 糖尿病大鼠口服胰岛素制剂的降血糖效应和生物利用度 | 第57-61页 |
| 3.3.1 糖尿病大鼠的口服降血糖效应 | 第57-58页 |
| 3.3.2 糖尿病大鼠口服给药后的生物利用度 | 第58-61页 |
| 本章小结 | 第61-62页 |
| 第四章 胰岛素生物素化脂质体口服吸收机制研究 | 第62-101页 |
| 1 材料与仪器 | 第62-64页 |
| 1.1 药品和试剂 | 第62-63页 |
| 1.2 细胞 | 第63-64页 |
| 1.3 仪器及设备 | 第64页 |
| 1.4 实验动物 | 第64页 |
| 2 实验方法 | 第64-73页 |
| 2.1 免疫荧光配体的合成 | 第64-66页 |
| 2.1.1 生物素-N-5-氨基荧光素的分离和纯化 | 第65页 |
| 2.1.2 生物素-N-5-氨基荧光素的定性和结构鉴别 | 第65-66页 |
| 2.2 胃肠道生物素受体表达 | 第66页 |
| 2.2.1 细胞培养 | 第66页 |
| 2.2.2 生物素受体表达测定 | 第66页 |
| 2.3 跨膜转运研究 | 第66-68页 |
| 2.3.1 上皮细胞层模型的构建 | 第66-67页 |
| 2.3.2 转运实验 | 第67-68页 |
| 2.3.3 TEER值的测定 | 第68页 |
| 2.3.4 脂质体对细胞紧密连接的影响 | 第68页 |
| 2.4 细胞摄取研究 | 第68-70页 |
| 2.4.1 FITC-ins的合成 | 第68-69页 |
| 2.4.2 细胞摄取 | 第69-70页 |
| 2.5 脂质体的内化机制探讨 | 第70-71页 |
| 2.5.1 罗丹明标记胆固醇的合成 | 第70页 |
| 2.5.2 脂质体内化的CLSM观察 | 第70-71页 |
| 2.6 生物素化脂质体的内吞途径 | 第71页 |
| 2.7 生物素化脂质体的细胞内转运机制研究 | 第71-72页 |
| 2.8 脂质体胃肠道转运的离体成像研究 | 第72页 |
| 2.9 脂质体跨上皮吸收观察 | 第72-73页 |
| 3 结果与讨论 | 第73-100页 |
| 3.1 生物素-N-5-氨基荧光素的合成 | 第73-76页 |
| 3.2 生物素受体表达 | 第76-77页 |
| 3.3 脂质体的跨膜转运 | 第77-81页 |
| 3.3.1 Caco-2细胞模型转运 | 第77-78页 |
| 3.3.2 M细胞模型转运 | 第78-79页 |
| 3.3.3 脂质体对Caco-2细胞单层TEER的影响 | 第79-80页 |
| 3.3.4 脂质体对细胞紧密连接的影响 | 第80-81页 |
| 3.4 脂质体的细胞摄取 | 第81-88页 |
| 3.4.1 FITC-ins的合成和性质 | 第81-82页 |
| 3.4.2 细胞摄取 | 第82-84页 |
| 3.4.3 温度对摄取的影响 | 第84-86页 |
| 3.4.4 摄取的竞争性 | 第86-88页 |
| 3.5 脂质体内化形式 | 第88-92页 |
| 3.5.1 Rhodamine-CH的合成及性质 | 第88-91页 |
| 3.5.2 脂质体入胞观察 | 第91-92页 |
| 3.6 生物素化脂质体细胞内吞途径 | 第92-95页 |
| 3.7 生物素化脂质体的细胞内转运 | 第95-97页 |
| 3.8 脂质体胃肠道转运的离体成像 | 第97-98页 |
| 3.9 脂质体跨上皮吸收 | 第98-100页 |
| 本章小结 | 第100-101页 |
| 第五章 胰岛素生物素化脂质体口服安全性的评价 | 第101-109页 |
| 1 材料与仪器 | 第101-102页 |
| 1.1 药品与试剂 | 第101-102页 |
| 1.2 细胞 | 第102页 |
| 1.3 仪器 | 第102页 |
| 2 实验方法 | 第102-104页 |
| 2.1 脂质体对细胞活力的影响 | 第102-103页 |
| 2.1.1 Caco-2细胞培养 | 第102-103页 |
| 2.1.2 MTT法测定细胞存活率 | 第103页 |
| 2.2 脂质体对细胞凋亡的影响 | 第103-104页 |
| 2.2.1 凋亡诱导 | 第103页 |
| 2.2.2 Annexin V FITC/PI法凋亡检测 | 第103-104页 |
| 3 结果与讨论 | 第104-108页 |
| 3.1 生物素化脂质体对细胞活力的影响 | 第104页 |
| 3.2 生物素化脂质体对细胞凋亡的影响 | 第104-108页 |
| 3.2.1 脂质体4h时对细胞凋亡的影响 | 第106-107页 |
| 3.2.2 脂质体24h时对细胞凋亡的影响 | 第107-108页 |
| 本章小结 | 第108-109页 |
| 全文总结 | 第109-111页 |
| 英文缩写注释 | 第111-112页 |
| 参考文献 | 第112-121页 |
| 致谢 | 第121-122页 |
| 拟发表论文 | 第122-123页 |
