| 摘要 | 第5-8页 |
| Abstract | 第8-10页 |
| 缩写 | 第11-12页 |
| 文献综述 | 第12-37页 |
| 1 精子发生的过程及参与精子发生的基因 | 第12-14页 |
| 1.1 精子的结构 | 第12-13页 |
| 1.2 精子发生的过程 | 第13页 |
| 1.3 参与精子发生的基因 | 第13-14页 |
| 2 参与精子尾部发生的相关基因研究进展 | 第14-18页 |
| 2.1 精子尾部的发生过程 | 第14-15页 |
| 2.2 精子尾部主要结构单元的功能及相关基因 | 第15-17页 |
| 2.3 精子尾部结构异常造成不育 | 第17-18页 |
| 3 精原干细胞培养和体内外诱导分化的研究进展 | 第18-22页 |
| 3.1 精原干细胞的来源 | 第18-19页 |
| 3.2 精原干细胞体外的长期培养 | 第19页 |
| 3.3 精原干细胞维持和分化的分子调控机制 | 第19-21页 |
| 3.4 精原干细胞的移植 | 第21-22页 |
| 3.5 精原干细胞的体外诱导分化 | 第22页 |
| 4 本研究的目的与意义 | 第22-24页 |
| 参考文献 | 第24-37页 |
| 第一章 Odf2、Odf3、Tektin4及Cabyr基因的克隆 | 第37-56页 |
| 摘要 | 第37-38页 |
| 1 材料与方法 | 第38-42页 |
| 1.1 实验材料 | 第38页 |
| 1.2 主要试剂 | 第38页 |
| 1.3 睾丸组织RNA提取与cDNA的合成 | 第38页 |
| 1.4 Odf2,Odf3,Tektin4和Cabyr基因cDNA序列的克隆 | 第38-39页 |
| 1.5 RACE | 第39-41页 |
| 1.6 序列的生物信息学分析 | 第41-42页 |
| 2 结果与分析 | 第42-53页 |
| 2.1 猪Odf2,Odf3,Tektin4和Cabyr基因的克隆 | 第42-43页 |
| 2.2 猪Odf2,Odf3,Tektin4和Cabyr序列及编码蛋白的结构分析 | 第43-44页 |
| 2.3 猪Odf2,Odf3,Tektin4和Cabyr同源性比较和系统发育树分析 | 第44-53页 |
| 2.3.1 同源性分析 | 第44-45页 |
| 2.3.2 序列的多重比较 | 第45-51页 |
| 2.3.3 进化树构建 | 第51-53页 |
| 3 讨论 | 第53-54页 |
| 4 结论 | 第54-56页 |
| 第二章 Odf2、Odf3、Tektin4及Cabyr基因的时空表达规律 | 第56-65页 |
| 摘要 | 第56-57页 |
| 1 材料与方法 | 第57-58页 |
| 1.1 实验材料 | 第57页 |
| 1.2 主要试剂 | 第57页 |
| 1.3 梅山猪组织RNA提取与cDNA合成 | 第57页 |
| 1.4 Odf2,Odf3,Tektin4和Cabyr基因组织表达特异性检测 | 第57-58页 |
| 1.5 Odf2,Odf3,Tektin4及Cabyr基因定量表达分析 | 第58页 |
| 1.6 睾丸石蜡切片的制作 | 第58页 |
| 1.7 附睾尾精子数测定 | 第58页 |
| 1.8 数据分析与统计 | 第58页 |
| 2 结果与分析 | 第58-62页 |
| 2.1 梅山猪Odf2,Odf3,Tektin4和Cabyr基因的组织表达特征 | 第58-60页 |
| 2.2 Odf2,Odf3,Tektin4和Cabyr基因在不同日龄段睾丸的表达规律 | 第60-61页 |
| 2.3 睾丸组织结构 | 第61页 |
| 2.4 梅山公猪附睾尾精子数测定 | 第61-62页 |
| 3 讨论 | 第62-64页 |
| 3.1 Odf2,Odf3,Tektin4Cabyr基因组织表达特异性 | 第62-63页 |
| 3.2 不同日龄梅山猪睾丸基因的表达与精子的发生 | 第63-64页 |
| 4 结论 | 第64-65页 |
| 第三章 Odf2、Odf3、Tektin4和Cabyr基因的亚细胞定位 | 第65-74页 |
| 摘要 | 第65页 |
| 1 材料与方法 | 第65-68页 |
| 1.1 实验材料 | 第65页 |
| 1.2 主要试剂 | 第65-66页 |
| 1.3 重组表达载体的构建及鉴定 | 第66页 |
| 1.4 融合表达载体转染NIH-3T3细胞 | 第66页 |
| 1.5 融合表达载体转染后目的基因mRNA的RT-PCR检测 | 第66-67页 |
| 1.6 多克隆抗体的制备与检测 | 第67-68页 |
| 2 结果与分析 | 第68-73页 |
| 2.1 重组表达载体的鉴定 | 第68-69页 |
| 2.2 重组质粒转染NIH-3T3细胞 | 第69页 |
| 2.3 RT-PCR检测融合蛋白在细胞中的表达 | 第69页 |
| 2.4 pcDNA3.1重组载体质粒鉴定 | 第69-72页 |
| 2.5 间接免疫荧光检测抗体的效价及亚细胞定位 | 第72-73页 |
| 3 讨论 | 第73页 |
| 4 结论 | 第73-74页 |
| 第四章 Odf2、Odf3、Tektin4和Cabyr在精子中的表达 | 第74-79页 |
| 摘要 | 第74页 |
| 1 材料与方法 | 第74-75页 |
| 1.1 实验材料 | 第74页 |
| 1.2 主要试剂 | 第74页 |
| 1.3 精子RNA的提取与反转录 | 第74-75页 |
| 1.4 Odf2、Odf3、Tektin4和Cabyr基因在精子RNA中的检测 | 第75页 |
| 1.5 间接免疫荧光检测蛋白在成熟精子中的定位 | 第75页 |
| 2 结果与分析 | 第75-76页 |
| 2.1 Odf2、Odf3、Tektin4和Cabyr基因在精子RNA的表达 | 第75页 |
| 2.2 Odf2、Odf3、Tektin4和Cabyr在精子中的定位 | 第75-76页 |
| 3 讨论 | 第76-78页 |
| 4 结论 | 第78-79页 |
| 第五章 猪精原干细胞体外培养与鉴定 | 第79-84页 |
| 摘要 | 第79页 |
| 1 材料与方法 | 第79-80页 |
| 1.1 实验材料 | 第79页 |
| 1.2 主要试剂 | 第79页 |
| 1.3 猪精原干细胞的分离培养与纯化 | 第79-80页 |
| 1.4 精原干细胞的鉴定 | 第80页 |
| 2 结果与分析 | 第80-82页 |
| 2.1 猪精原干细胞的形态和AKP染色 | 第80-81页 |
| 2.2 标记基因的检测 | 第81-82页 |
| 3 讨论 | 第82-83页 |
| 4 结论 | 第83-84页 |
| 第六章 利用猪和小鼠的SSCs验证Odf2、Odf3、Tektin4和Cabyr基因的功能 | 第84-97页 |
| 摘要 | 第84-85页 |
| 1 材料与方法 | 第85-88页 |
| 1.1 主要试剂 | 第85页 |
| 1.2 实验设计 | 第85页 |
| 1.3 半定量PCR检测猪精原干细胞体外分化的影响 | 第85-87页 |
| 1.4 荧光定量PCR检测小鼠精原干细胞系体外分化的影响 | 第87-88页 |
| 2 结果与分析 | 第88-94页 |
| 2.1 转染重组质粒后的精原干细胞 | 第88页 |
| 2.2 转染重组质粒后Odf2、Odf3、Tektin4和Cabyr基因mRNA水平的鉴定 | 第88页 |
| 2.3 过表达目的基因对于猪精原干细胞体外分化的影响 | 第88-91页 |
| 2.4 不同浓度的RA对于小鼠精原干细胞分化的影响 | 第91-92页 |
| 2.5 RA诱导后过表达目的基因对于精原干细胞系体外分化的影响 | 第92-94页 |
| 3 讨论 | 第94-96页 |
| 3.1 Odf2、Odf3、Tektin4和Cabyr过表达对于猪精原干细胞体外分化的影响 | 第94-95页 |
| 3.2 Odf2、Odf3、Tektin4和Cabyr过表达对于小鼠精原干细胞系体外分化的影响 | 第95-96页 |
| 4 结论 | 第96-97页 |
| 参考文献 | 第97-105页 |
| 主要结论与意义 | 第105页 |
| 特色与创新点 | 第105-106页 |
| 不足及下一步工作建议 | 第106-107页 |
| 附图 | 第107-111页 |
| 致谢 | 第111-112页 |
| 攻读学位期间发表学术论文目录 | 第112-114页 |
