| 中文摘要 | 第3-4页 |
| Abstract | 第4-5页 |
| 第一章 引言 | 第9-18页 |
| 1.1 肺炎链球菌概览 | 第9-12页 |
| 1.1.1 肺炎链球菌菌株 | 第9页 |
| 1.1.2 肺炎链球菌血清型 | 第9页 |
| 1.1.3 肺炎链球菌的表面结构 | 第9-11页 |
| 1.1.4 肺炎链球菌的致病机制 | 第11-12页 |
| 1.1.5 肺炎链球菌引起的疾病 | 第12页 |
| 1.2 肺炎链球菌疫苗在国内外研究进展 | 第12-15页 |
| 1.2.1 全菌体疫苗 | 第12-13页 |
| 1.2.2 多糖疫苗 | 第13页 |
| 1.2.3 结合疫苗 | 第13-14页 |
| 1.2.4 肺炎链球菌蛋白疫苗 | 第14-15页 |
| 1.3 PspA及其免痰学特性 | 第15-16页 |
| 1.3.1 PspA概述 | 第15页 |
| 1.3.2 PspA的免疫学特性 | 第15页 |
| 1.3.3 PspA的制备技术 | 第15-16页 |
| 1.3.4 PspA的应用前景 | 第16页 |
| 1.4 本论文研究的主要内容及创新点 | 第16-18页 |
| 1.4.1 本论文研究的理论依据 | 第16页 |
| 1.4.2 本论文的研究内容 | 第16-17页 |
| 1.4.3 本论文的主要创新点 | 第17-18页 |
| 第二章 重组蛋白PsPA05-PsPA6B的制备 | 第18-47页 |
| 2.1 材料与仪器 | 第18-19页 |
| 2.1.1 菌株和质粒 | 第18页 |
| 2.1.2 主要试剂 | 第18页 |
| 2.1.3 主要仪器 | 第18-19页 |
| 2.2 材料与方法 | 第19-28页 |
| 2.2.1 肺炎链球菌的培养与鉴定 | 第19-20页 |
| 2.2.1.1 肺炎链球菌的培养 | 第19页 |
| 2.2.1.2 鉴定方法 | 第19-20页 |
| 2.2.2 肺炎链球菌基因组的提取 | 第20-21页 |
| 2.2.3 PCR扩增引物的设计 | 第21页 |
| 2.2.4 PCR扩增目的基因 | 第21-22页 |
| 2.2.5 胶回收 | 第22-23页 |
| 2.2.6 双酶切 | 第23页 |
| 2.2.7 大肠杆菌感受态的制备 | 第23-24页 |
| 2.2.8 TA克隆 | 第24页 |
| 2.2.9 菌落PCR验证 | 第24-25页 |
| 2.2.10 质粒提取 | 第25-26页 |
| 2.2.11 酶连反应 | 第26-27页 |
| 2.2.12 重组质粒的鉴定 | 第27页 |
| 2.2.13 重组菌的培养及重组蛋白的诱导表达 | 第27页 |
| 2.2.14 SDS-PAGE聚丙烯酰胺凝胶电泳方法 | 第27-28页 |
| 2.2.15 重组蛋白纯化方法 | 第28页 |
| 2.3 结果与讨论 | 第28-47页 |
| 2.3.1 肺炎链球菌的培养及鉴定 | 第29-31页 |
| 2.3.1.1 肺炎链球菌的培养 | 第29页 |
| 2.3.1.2 肺炎链球菌的鉴定 | 第29-31页 |
| 2.3.2 亚型05和6B的PspA基因的克隆 | 第31-32页 |
| 2.3.3 TA克隆及重组子的验证 | 第32-35页 |
| 2.3.3.1 PCR验证 | 第33-34页 |
| 2.3.3.2 双酶切验证 | 第34-35页 |
| 2.3.4 PspA05-PspA6B-pET27b(+)重组质粒的构建与验证 | 第35-44页 |
| 2.3.4.1 PspA05-PspA6B-pET27b(+)重组质粒的构建 | 第36-37页 |
| 2.3.4.2 PspA6B-pET27b(+)和PspA05-pET27b(+)重组子验证 | 第37-39页 |
| 2.3.4.3 PspA05-PspA6B-pET27b(+)重组子验证 | 第39-41页 |
| 2.3.4.4 重组质粒PspA05-PspA6B-pET27b(+)中PspA基因序列分析 | 第41-44页 |
| 2.3.5 重组蛋白PspA05-PspA6B的表达及纯化 | 第44-47页 |
| 第三章 肺炎链球菌表面蛋白A重组蛋白免疫原性研究 | 第47-55页 |
| 3.1 材料和仪器 | 第47页 |
| 3.1.1 主要实验试剂与仪器 | 第47页 |
| 3.1.2 实验动物和实验菌种 | 第47页 |
| 3.2 实验方法 | 第47-50页 |
| 3.2.1 重组蛋白PspA05-PspA6B的小鼠免疫 | 第47页 |
| 3.2.2 血清中抗体滴度的ELISA检测 | 第47-48页 |
| 3.2.3 重组蛋白PspA05-PspA6B的Western Blot检测 | 第48-49页 |
| 3.2.4 血清中蛋白抗血清对全菌体外膜蛋白的亲和度 | 第49页 |
| 3.2.5 调理吞噬实验 | 第49-50页 |
| 3.2.6 对不同菌型肺炎链球菌攻击的交叉保护作用 | 第50页 |
| 3.3 结果与讨论 | 第50-55页 |
| 3.3.1 血清中抗体滴度 | 第50-51页 |
| 3.3.2 重组蛋白PspA05-PspA6B的免疫印迹分析 | 第51页 |
| 3.3.3 血清中抗体对全菌体外膜蛋白的亲和度 | 第51-52页 |
| 3.3.4 调理吞噬实验 | 第52-53页 |
| 3.3.5 动物交叉免疫保护性实验 | 第53-55页 |
| 结论 | 第55-56页 |
| 参考文献 | 第56-60页 |
| 致谢 | 第60-61页 |
| 个人简历 | 第61页 |
