| 摘要 | 第5-7页 |
| Abstract | 第7-9页 |
| 引言 | 第15-17页 |
| 第一章 文献综述 | 第17-28页 |
| 第一节 WSSV疫苗研究进展 | 第17-22页 |
| 1 前言 | 第17-18页 |
| 2 对虾白斑综合征病毒的结构蛋白 | 第18-19页 |
| 3 DNA疫苗 | 第19-20页 |
| 4 蛋白质亚单位疫苗 | 第20-21页 |
| 5 总结 | 第21-22页 |
| 第二节 细胞穿膜肽的研究进展 | 第22-26页 |
| 1 前言 | 第22-23页 |
| 2 细胞穿膜肽的结构特点 | 第23-24页 |
| 3 细胞穿膜肽的穿膜机制 | 第24-26页 |
| 4 细胞穿膜肽的应用 | 第26页 |
| 第三节 本实验的研究目的和意义 | 第26-28页 |
| 1 研究目的 | 第26-27页 |
| 2 研究意义 | 第27-28页 |
| 第二章 克氏原螯虾口服毕赤酵母表达的三种穿膜肽与GFP的融合蛋白穿肠膜效果的比较 | 第28-65页 |
| 第一节 表达载体的构建 | 第29-45页 |
| 1 材料和方法 | 第29-39页 |
| 1.1 材料 | 第29-31页 |
| 1.1.1 实验仪器 | 第29页 |
| 1.1.2 实验试剂 | 第29-31页 |
| 1.1.3 引物设计 | 第31页 |
| 1.2 实验方法 | 第31-39页 |
| 1.2.1 GFP基因的克隆 | 第31-33页 |
| 1.2.2 TAT-GFP、R9-GFP和Pentratin-GFP目的片段的获得 | 第33-35页 |
| 1.2.3 目的基因的连接及转化 | 第35-36页 |
| 1.2.4 目的基因俊落PCR鉴定及测序 | 第36-37页 |
| 1.2.5 CPPs-GFP质粒和pGAPZaA表达质粒的提取 | 第37页 |
| 1.2.6 质粒DNA的双酶切及切胶回收 | 第37-38页 |
| 1.2.7 pGAPZaA-目的基因表达载体的构建 | 第38页 |
| 1.2.8 重组表达质粒转化大肠杆菌Top10 | 第38页 |
| 1.2.9 重组质粒的菌落PCR鉴定 | 第38-39页 |
| 2 实验结果 | 第39-44页 |
| 2.1 目的基因的PCR扩增 | 第39-42页 |
| 2.1.1 GFP基因的获得 | 第39-40页 |
| 2.1.2 TAT-GFP、R9-GFP和Penetratin-GFP基因的获得 | 第40-41页 |
| 2.1.3 目的基因菌落PCR鉴定 | 第41-42页 |
| 2.2 重组表达质粒载体构建与PCR鉴定 | 第42-44页 |
| 2.2.1 目的基因质粒双酶切结果 | 第42页 |
| 2.2.2 重组质粒PCR鉴定 | 第42-44页 |
| 2.2.3 重组质粒DNA测序 | 第44页 |
| 3 小结 | 第44-45页 |
| 第二节 目的基因在毕赤酵母中的分泌表达及穿膜效果初步研究 | 第45-65页 |
| 1 材料与方法 | 第45-55页 |
| 1.1 材料 | 第45-47页 |
| 1.1.1 实验动物 | 第45页 |
| 1.1.2 实验仪器 | 第45页 |
| 1.1.3 实验试剂 | 第45-47页 |
| 1.1.4 引物设计 | 第47页 |
| 1.2 实验方法 | 第47-55页 |
| 1.2.1 重组质粒的大量提取 | 第47-48页 |
| 1.2.2 重组质粒Bln Ⅰ酶切线性化 | 第48-49页 |
| 1.2.3 重组质粒转化毕赤酵母 | 第49-51页 |
| 1.2.4 重组毕赤酵母PCR鉴定 | 第51-53页 |
| 1.2.5 重组酵母表达产物的检测 | 第53-54页 |
| 1.2.6 冷冻干燥目的蛋白 | 第54-55页 |
| 1.2.7 重组蛋白体内肠道穿膜观察 | 第55页 |
| 2 结果 | 第55-59页 |
| 2.1 重组质粒在毕赤酵母分泌表达结果 | 第55-58页 |
| 2.1.1 重组质粒Bln Ⅰ酶切线性化 | 第55-56页 |
| 2.1.2 重组酵母PCR鉴定 | 第56-57页 |
| 2.1.3 重组酵母发酵上清SDS-PAGE电泳结果 | 第57-58页 |
| 2.2 细胞穿膜肽携带GFP穿膜效果 | 第58-59页 |
| 2.2.1 GFP肠道穿膜观察 | 第58-59页 |
| 2.2.2 GFP心脏和肌肉穿膜结果 | 第59页 |
| 3 小结与讨论 | 第59-65页 |
| 3.1 小结 | 第59-60页 |
| 3.2 讨论 | 第60-65页 |
| 3.2.1 毕赤酵母的电击转化 | 第60页 |
| 3.2.2 重组酵母PCR鉴定 | 第60-65页 |
| 第三章 WSSV囊膜蛋白VP28、VP26与穿膜肽的融合蛋白在毕赤酵母中的表达 | 第65-83页 |
| 第一节 VP28和VP26表达载体的构建 | 第65-75页 |
| 1 材料与方法 | 第65-70页 |
| 1.1 实验材料 | 第65-66页 |
| 1.1.1 主要仪器 | 第65页 |
| 1.1.2 实验试剂 | 第65页 |
| 1.1.3 引物 | 第65-66页 |
| 1.2 实验方法 | 第66-70页 |
| 1.2.1 VP28和VP26基因的获得 | 第66-67页 |
| 1.2.2 VP28-TAT/R9、VP26-TAT/R9和GFP-TAT/R9目的片段的扩增 | 第67-69页 |
| 1.2.3 VP28-TAT/R9、VP26-TAT/R9和GFP-TAT/R9基因的连接及转化 | 第69-70页 |
| 1.2.4 菌落PCR鉴定及测序 | 第70页 |
| 1.2.5 VP28-TAT/R9、VP26-TAT/R9和GFP-TAT/R9质粒提取 | 第70页 |
| 1.2.6 VP28-TAT/R9、VP26-TAT/R9和GFP-TAT/R9重组表达质粒的构建 | 第70页 |
| 2 实验结果 | 第70-74页 |
| 2.1 目的基因的PCR扩增 | 第70-73页 |
| 2.1.1 VP28、VP26和GFP基因的获得 | 第70-71页 |
| 2.1.2 VP28-TAT/R9、VP26-TAT/R9和GFP-TAT/R9基因的获得 | 第71-72页 |
| 2.1.3 菌落PCR鉴定 | 第72-73页 |
| 2.2 重组表达质粒构建及菌落PCR鉴定 | 第73-74页 |
| 3 小结与讨论 | 第74-75页 |
| 3.1 小结 | 第74页 |
| 3.2 讨论 | 第74-75页 |
| 第二节 VP28和VP26在毕赤酵母中分泌表达 | 第75-83页 |
| 1 材料与方法 | 第75-77页 |
| 1.1 材料 | 第75-76页 |
| 1.1.1 实验试剂 | 第75-76页 |
| 1.1.2 实验仪器 | 第76页 |
| 1.2 实验方法 | 第76-77页 |
| 1.2.1 重组表达质粒大量提取 | 第76页 |
| 1.2.2 表达质粒线性化 | 第76页 |
| 1.2.3 表达质粒转化毕赤酵母及PCR检测 | 第76页 |
| 1.2.4 重组酵母表达产物的检测 | 第76-77页 |
| 2 结果 | 第77-81页 |
| 2.1 重组酵母PCR检测结果 | 第77-81页 |
| 2.1.1 重组质粒线性化 | 第77-78页 |
| 2.1.2 重组酵母PCR鉴定结果 | 第78-79页 |
| 2.1.3 重组酵母发酵上清SDS-PAGE电泳结果 | 第79-81页 |
| 3 小结与讨论 | 第81-83页 |
| 3.1 小结 | 第81页 |
| 3.2 讨论 | 第81-83页 |
| 第四章 全文总结与展望 | 第83-84页 |
| 1 全文总结 | 第83页 |
| 2 展望 | 第83-84页 |
| 参考文献 | 第84-91页 |
| 致谢 | 第91-92页 |
| 个人简历 | 第92页 |
| 已发表和拟发表的论文 | 第92页 |
