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PICK1在LPS诱导的急性肝损伤中的作用及对巨噬细胞极化的影响

中英文缩略词对照第9-11页
中文摘要第11-14页
Abstract第14-16页
1 前言第17-19页
2 实验材料第19-23页
    2.1 实验动物第19页
    2.2 药品与试剂第19-21页
        2.2.1 抗体第19页
        2.2.2 主要药品与试剂第19-21页
    2.3 仪器与设备第21-22页
    2.4 图象分析软件第22-23页
3 实验方法第23-32页
    3.1 实验动物的处理和小鼠急性肝损伤模型的建立第23页
    3.2 肝组织病理学检查第23页
    3.3 血清学指标第23-24页
    3.4 ELISA法检测小鼠血清和细胞上清液中IL-6,IL-10的含量第24页
        3.4.1 标本处理第24页
        3.4.2 实验检测步骤第24页
    3.5 肝脏灌流与KCs的分离和培养第24-25页
    3.6 细胞培养第25页
    3.7 Real time-PCR法检测小鼠肝脏组织与RAW264.7细胞、THP-1细胞中相关基因的mRNA动态表达第25-28页
        3.7.1 总RNA的提取和逆转录第25-26页
        3.7.2 PCR扩增实验第26-28页
    3.8. Western Blot法检测小鼠肝脏组织与RAW264.7细胞中相关基因的蛋白动态表达第28-30页
        3.8.1 蛋白样品的制备第28页
        3.8.2. SDS-PAGE电泳第28-29页
        3.8.3 转膜第29页
        3.8.4 抗体封闭第29页
        3.8.5 ECL显色第29页
        3.8.6 图像处理第29-30页
    3.9 细胞转染实验第30-31页
        3.9.1 siRNA的转染实验第30页
        3.9.2 PICK1质粒的构建第30-31页
    3.10 流式细胞术检测巨噬细胞表型变化第31页
    3.11 数据处理第31-32页
4 实验结果第32-48页
    4.1 LPS诱导的小鼠急性肝损伤模型中各时间点的确定和肝组织中PICK1的动态表达情况第32-33页
    4.2 PICK1抑制剂FSC-231预处理后,小鼠急性肝损伤组织中炎性相关物质和PICK1的表达情况第33-35页
        4.2.1 各组肝脏的病理学检测第33页
        4.2.2 各组的小鼠血清中ALT酶,AST酶,IL-6因子的含量检测第33-34页
        4.2.3 各组的小鼠肝组织中炎性相关物质和PICK1的表达变化第34页
        4.2.4 各组的小鼠肝组织灌流的KCs中炎性相关物质和PICK1的表达变化第34-35页
    4.3 PICK1在体外LPS诱导和M1/M2型巨噬细胞中的动态表达情况第35-37页
        4.3.1 LPS诱导的RAW264.7细胞中TNF-α、IL-6和PICK1的动态表达第36页
        4.3.2 LPS诱导的THP-1细胞中TNF-α、IL-6和PICK1的动态表达第36页
        4.3.3 LPS和IFN-γ诱导的M1型和IL-4诱导的M2型巨噬细胞中极化标志物和PICK1的动态表达第36-37页
    4.4 PICK1对LPS+IFN-γ刺激诱导的M1型巨噬细胞极化的影响第37-42页
        4.4.1 过表达PICK1对LPS+IFN-γ刺激诱导的M1型巨噬细胞极化的影响第37-39页
        4.4.2 沉默PICK1对LPS+IFN-γ刺激诱导的M1巨噬细胞极化的影响第39-42页
    4.5 PICK1对IL-4刺激诱导的M2型巨噬细胞极化的影响第42-43页
        4.5.1 沉默或过表达PICK1后,M2巨噬细胞中PICK1的表达第42页
        4.5.2 沉默或过表达PICK1后,M2巨噬细胞中M2样标志物的表达第42页
        4.5.3 沉默或过表达PICK1后,M2巨噬细胞中Arg-1+细胞所占比例的变化第42-43页
    4.6 PICK1抑制剂FSC-231预处理LPS+IFN-γ刺激诱导的M1/IL-4刺激诱导的M2型RAW264.7细胞后,M1/M2巨噬细胞极化的变化情况第43-45页
        4.6.1 FSC-231预处理M1巨噬细胞后,M1巨噬细胞极化的变化情况第43-44页
        4.6.2 FSC-231预处理M2巨噬细胞后,M2巨噬细胞极化的变化情况第44-45页
    4.7 PICK1调控LPS+IFN-γ刺激诱导的M1/IL-4刺激诱导的M2巨噬细胞极化可能涉及的部分机制第45-48页
        4.7.1 PICK1抑制LPS+IFN-γ刺激诱导的M1巨噬细胞极化的下游NF-κB信号通路活性的研究第45-46页
        4.7.2. PICK1通过影响IL-4刺激诱导的M2型巨噬细胞中caveolin-1的表达而促进M2巨噬细胞极化第46-48页
5 讨论第48-52页
6 小结第52-53页
参考文献第53-58页
附录第58-59页
致谢第59-60页
综述第60-71页
    参考文献第66-71页

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