| 摘要 | 第4-5页 |
| Abstract | 第5-6页 |
| 引言 | 第10-11页 |
| 1 文献综述 | 第11-27页 |
| 1.1 慢性肾功能衰竭 | 第11-12页 |
| 1.1.1 概述 | 第11页 |
| 1.1.2 尿毒症毒素 | 第11-12页 |
| 1.1.3 慢性肾衰竭的治疗 | 第12页 |
| 1.2 β_2-微球蛋白与相关疾病 | 第12-18页 |
| 1.2.1 β_2-微球蛋白简介 | 第12-14页 |
| 1.2.2 β_2-微球蛋白的致病原因 | 第14页 |
| 1.2.3 透析相关淀粉样变的普通治疗 | 第14页 |
| 1.2.4 液净化治疗透析相关淀粉样变 | 第14-18页 |
| 1.3 纳米抗体技术 | 第18-26页 |
| 1.3.1 纳米抗体的结构特征 | 第18-20页 |
| 1.3.2 纳米抗体的生物化学特性 | 第20-21页 |
| 1.3.3 纳米抗体的应用研究 | 第21-26页 |
| 1.4 本论文研究目的、内容和意义 | 第26-27页 |
| 2 抗β_2-微球蛋白纳米抗体的筛选 | 第27-43页 |
| 2.1 引言 | 第27页 |
| 2.2 实验材料与仪器 | 第27-29页 |
| 2.2.1 材料和试剂 | 第27-28页 |
| 2.2.2 主要仪器及耗材 | 第28-29页 |
| 2.3 实验方法 | 第29-33页 |
| 2.3.1 建立纳米抗体噬菌体展示库 | 第29页 |
| 2.3.2 扩增噬菌体 | 第29页 |
| 2.3.3 测定噬菌体滴度 | 第29-30页 |
| 2.3.4 筛选过程 | 第30-31页 |
| 2.3.5 ELISA北较单克隆噬菌体活性 | 第31-32页 |
| 2.3.6 序列分析 | 第32页 |
| 2.3.7 琼脂糖凝胶电泳 | 第32-33页 |
| 2.4 实验结果与讨论 | 第33-42页 |
| 2.4.1 纳米抗体的筛选 | 第33页 |
| 2.4.2 ELISA比较单克隆噬菌体亲和活性 | 第33-40页 |
| 2.4.3 测序结果分析 | 第40-41页 |
| 2.4.4 去除重复序列后二次ELISA比较亲和活性 | 第41-42页 |
| 2.5 小结 | 第42-43页 |
| 3 抗β_2-微球蛋白纳米抗体的表达纯化与亲和活性检测 | 第43-65页 |
| 3.1 引言 | 第43页 |
| 3.2 实验材料与仪器 | 第43-45页 |
| 3.2.1 材料和试剂 | 第43-44页 |
| 3.2.2 主要仪器及耗材 | 第44-45页 |
| 3.3 实验方法 | 第45-51页 |
| 3.3.1 目的基因的获得与质粒构建 | 第45-46页 |
| 3.3.2 重组质粒的转化 | 第46-47页 |
| 3.3.3 纳米抗体的表达 | 第47页 |
| 3.3.4 SDS-聚丙烯酰胺凝胶电泳 | 第47-48页 |
| 3.3.5 菌体的破碎 | 第48页 |
| 3.3.6 固定化金属离子亲和层析 | 第48页 |
| 3.3.7 测定目的蛋白的浓度及纯度 | 第48-50页 |
| 3.3.8 ELISA检测纳米抗体的亲和活性 | 第50页 |
| 3.3.9 Biacore测定纳米抗体的亲和常数 | 第50-51页 |
| 3.3.10 抗β_2-微球蛋白纳米抗体的高密度发酵 | 第51页 |
| 3.4 实验结果与讨论 | 第51-64页 |
| 3.4.1 重组表达载体序列检测 | 第51-53页 |
| 3.4.2 纳米抗体的表达 | 第53-54页 |
| 3.4.3 纳米抗体表达的可溶性考察 | 第54-56页 |
| 3.4.4 固定化金属离子亲和层析 | 第56-61页 |
| 3.4.5 ELISA检测纳米抗体的亲和活性 | 第61-63页 |
| 3.4.6 Biacore测定纳米抗体的亲和常数 | 第63-64页 |
| 3.4.7 抗β_2-微球蛋白纳米抗体的高密度发酵 | 第64页 |
| 3.5 小结 | 第64-65页 |
| 4 纳米抗体免疫吸附剂的制备及吸附性能评价 | 第65-79页 |
| 4.1 引言 | 第65页 |
| 4.2 实验材料与仪器 | 第65-66页 |
| 4.2.1 材料与试剂 | 第65页 |
| 4.2.2 主要仪器及耗材 | 第65-66页 |
| 4.3 实验方法 | 第66-71页 |
| 4.3.1 纳米抗体吸附剂的制备与条件优化 | 第66-69页 |
| 4.3.2 环氧基密度、氨基密度和羧基密度的测定方法 | 第69-70页 |
| 4.3.3 纳米抗体吸附剂对β_2-微球蛋白的特异性吸附评价 | 第70页 |
| 4.3.4 纳米抗体吸附剂对β_2-微球蛋白的吸附动力学考察 | 第70页 |
| 4.3.5 纳米抗体吸附剂对β_2-微球蛋白的等温吸附评价 | 第70页 |
| 4.3.6 纳米抗体吸附剂对β_2-微球蛋白的血浆吸附考察 | 第70-71页 |
| 4.4 实验结果与讨论 | 第71-77页 |
| 4.4.1 凝胶环氧基密度和氨基密度随反应时间的变化 | 第71-72页 |
| 4.4.2 吸附剂合成过程优化 | 第72-73页 |
| 4.4.3 纳米抗体吸附剂的特异性吸附评价 | 第73-74页 |
| 4.4.4 纳米抗体吸附剂对β_2-微球蛋白的吸附动力学考察 | 第74-75页 |
| 4.4.5 纳米抗体吸附剂对β_2-微球蛋白的等温吸附曲线 | 第75-76页 |
| 4.4.6 纳米抗体吸附剂对β_2-微球蛋白的血浆吸附考察 | 第76-77页 |
| 4.4.7 纳米抗体吸附剂的非特异性吸附分析 | 第77页 |
| 4.5 小结 | 第77-79页 |
| 结论 | 第79-80页 |
| 展望 | 第80-81页 |
| 参考文献 | 第81-86页 |
| 攻读硕士学位期间发表学术论文情况 | 第86-87页 |
| 致谢 | 第87-88页 |
