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黄瓜低霜霉威残留性相关基因SDH的克隆及遗传转化

摘要第10-12页
英文摘要第12-14页
1 前言第15-24页
    1.1 试验研究目的与意义第15-16页
    1.2 国内外研究进展第16-22页
        1.2.1 农药残留概述第16-19页
        1.2.2 降低农药残留方法研究进展第19-21页
        1.2.3 农药残留相关基因的研究进展第21-22页
        1.2.4 SDH基因的研究进展第22页
    1.3 试验研究的内容第22-23页
    1.4 技术路线第23-24页
2 材料与方法第24-37页
    2.1 试验材料第24-25页
        2.1.1 植物材料第24页
        2.1.2 主要仪器第24页
        2.1.3 试验试剂、酶和菌株第24-25页
    2.2 黄瓜CsSDH基因的克隆第25-29页
        2.2.1 总RNA的提取第25页
        2.2.2 cDNA第一条链的合成第25页
        2.2.3 引物的设计与合成第25-26页
        2.2.4 黄瓜CsSDH基因PCR扩增第26-27页
        2.2.5 PCR产物的回收与测序第27-29页
    2.3 黄瓜CsSDH基因的序列分析第29-30页
    2.4 黄瓜CsSDH基因在霜霉威处理下的表达分析第30页
    2.5 黄瓜琥珀酸脱氢酶在霜霉威处理后的活性变化第30-31页
    2.6 CsSDH基因的过表达片段的获得第31页
    2.7 黄瓜CsSDH基因过表达载体的构建第31-33页
        2.7.1 重组质粒和PBI121空载体的双酶切第31-32页
        2.7.2 植物表达载体与目的基因片段的连接与转化第32页
        2.7.3 重组子的验证第32-33页
        2.7.4 冻融法将重组质粒导入根癌农杆菌第33页
        2.7.5 农杆菌中重组质粒的PCR及酶切鉴定第33页
    2.8 黄瓜CsSDH基因对拟南芥的遗传转化第33-36页
        2.8.1 拟南芥材料第33-34页
        2.8.2 拟南芥转基因植株T0代种子获得第34页
        2.8.3 抗性种子的筛选第34-35页
        2.8.4 突变体拟南芥植株的获得及DNA的提取第35页
        2.8.5 拟南芥转基因植株的分子检测第35-36页
        2.8.6 拟南芥转基因植株T_1代种子的获得第36页
    2.9 黄瓜CsSDH基因的亚细胞定位观察第36-37页
3 结果与分析第37-52页
    3.1 黄瓜CsSDH基因的克隆第37-38页
        3.1.1 基因组总RNA的提取第37页
        3.1.2 CsSDH基因的PCR扩增与酶切验证第37-38页
    3.2 CsSDH生物信息学分析第38-41页
        3.2.1 氨基酸序列及理化性质第38-39页
        3.2.2 CsSDH功能结构域分析第39-40页
        3.2.3 CsSDH二级和三维结构分析第40页
        3.2.4 CsSDH蛋白的系统进化树第40-41页
    3.3 CsSDH基因在不同品种,不同时间,不同组织部位的表达量分析第41-43页
    3.4 不同品种、不同时间,不同组织部位的琥珀酸脱氢酶活性测定第43-44页
    3.5 CsSDH基因表达载体的构建与验证第44-47页
        3.5.1 CsSDH基因的获得第44-45页
        3.5.2 黄瓜CsSDH基因过表达载体的构建第45-46页
        3.5.3 农杆菌中过表达载体PBI-SDH的PCR及酶切检测第46-47页
    3.6 黄瓜CsSDH基因对拟南芥的遗传转化第47-49页
        3.6.1 拟南芥转基因植株T0代种子获得第47-48页
        3.6.2 抗性种子的筛选第48页
        3.6.3 突变体拟南芥植株的获得及DNA的提取第48页
        3.6.4 转基因植株PCR检测第48-49页
        3.6.5 拟南芥转基因植株T1代种子的收获第49页
    3.7 黄瓜Cs SDH基因的亚细胞定位观察第49-52页
        3.7.1 目的基因的PCR扩增第49页
        3.7.2 重组表达载体CsSDH-e GFP的构建第49-50页
        3.7.3 烟草亚细胞定位第50-52页
4 讨论第52-55页
    4.1 霜霉威胁迫下,高低农残品种中黄瓜CsSDH基因的表达量变化第52页
    4.2 CsSDH基因编码酶在降低农药残留残过程中的可能作用方式第52-53页
    4.3 黄瓜CsSDH基因对拟南芥的遗传转化第53页
    4.4 本研究的创新点第53-54页
    4.5 本研究的不足第54页
    4.6 今后研究方向与展望第54-55页
5 结论第55-56页
致谢第56-57页
参考文献第57-66页
附录第66-67页
攻读硕士学位期间发表的学术论文第67页

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