| 摘要 | 第7-8页 |
| ABSTRACT | 第8页 |
| 第一章 文献综述 | 第9-17页 |
| 1 希金斯刺盘孢及其十字花科蔬菜炭疽病 | 第9-12页 |
| 1.1 希金斯刺盘孢与十字花科蔬菜炭疽病 | 第9-10页 |
| 1.2 希金斯刺盘孢的半活体营养方式 | 第10页 |
| 1.3 希金斯刺盘孢的侵染致病过程 | 第10-11页 |
| 1.4 其它炭疽菌致病机理研究 | 第11-12页 |
| 2 真菌孢子形成机理的研究 | 第12-13页 |
| 2.1 模式植物拟南芥 | 第12-13页 |
| 2.2 拟南芥的抗病机理的研究 | 第13页 |
| 3 真菌遗传转化研究进展 | 第13-16页 |
| 3.1 真菌的遗传转化 | 第13页 |
| 3.2 农杆菌介导转化法 | 第13-15页 |
| 3.3 农杆菌介导转化的原理 | 第15-16页 |
| 4 研究的目的与意义 | 第16-17页 |
| 第二章 刺盘孢高效转化体系的建立及插入体库的构建 | 第17-24页 |
| 1 材料与方法 | 第17-20页 |
| 1.1 材料 | 第17-18页 |
| 1.1.1 希金斯刺盘孢菌株及培养基 | 第17页 |
| 1.1.2 农杆菌菌株及培养基 | 第17页 |
| 1.1.3 载体、抗性标记 | 第17-18页 |
| 1.1.4 培养基和试剂 | 第18页 |
| 1.1.5 抗生素 | 第18页 |
| 1.2 方法 | 第18-20页 |
| 1.2.1 抑制希金斯刺盘孢生长的潮霉素浓度的筛选 | 第18-19页 |
| 1.2.2 希金斯刺盘孢T-DNA转化 | 第19页 |
| 1.2.3 希金斯刺盘孢转化技术参数的确定 | 第19页 |
| 1.2.4 希金斯刺盘孢Ch-1菌株T-DNA标记插入体库的构建 | 第19-20页 |
| 2 结果与分析 | 第20-23页 |
| 2.1 抑制希金斯刺盘孢生长的潮霉素浓度的筛选 | 第20页 |
| 2.2 用于转化的Ch-1分生孢子最佳成熟度的筛选 | 第20-21页 |
| 2.3 用于转化的Ch-1最佳孢子浓度的筛选 | 第21页 |
| 2.4 用于转化的农杆菌菌液浓度的筛选 | 第21页 |
| 2.5 共培养最佳时间及最适温度的筛选 | 第21-23页 |
| 2.6 农杆菌介导的希金斯刺盘孢的遗传转化技术及T-DNA插入体库的构建 | 第23页 |
| 3 结论与讨论 | 第23-24页 |
| 3.1 结论 | 第23页 |
| 3.2 讨论 | 第23-24页 |
| 第三章 希金斯刺盘孢插入体库的质量评估 | 第24-33页 |
| 1 材料与方法 | 第24-28页 |
| 1.1 材料 | 第24-25页 |
| 1.1.1 菌株 | 第24页 |
| 1.1.2 培养基、缓冲液及其它试剂 | 第24-25页 |
| 1.1.3 酶、试剂盒及其它试剂 | 第25页 |
| 1.1.4 引物 | 第25页 |
| 1.1.5 DNA分子量标记 | 第25页 |
| 1.2 方法 | 第25-28页 |
| 1.2.1 基因组DNA提取 | 第25-26页 |
| 1.2.2 质粒的提取 | 第26页 |
| 1.2.3 转化子的PCR鉴定 | 第26页 |
| 1.2.4 突变体基因组DNA点杂交分析 | 第26-27页 |
| 1.2.4.1 点膜及固定 | 第26-27页 |
| 1.2.4.2 预杂交 | 第27页 |
| 1.2.4.3 探针标记及杂交 | 第27页 |
| 1.2.4.4 洗膜、压片及显影 | 第27页 |
| 1.2.5 转化子生长能力变化分析 | 第27页 |
| 1.2.6.转化子产孢培养基选择 | 第27-28页 |
| 2 结果与分析 | 第28-31页 |
| 2.1 转化子的PCR鉴定 | 第28页 |
| 2.2 点杂交分析 | 第28-29页 |
| 2.3 转化子生长能力变化分析 | 第29页 |
| 2.4 转化子分生孢子形成特性研究 | 第29-31页 |
| 2.5 产孢培养基选择 | 第31页 |
| 3 结论和讨论 | 第31-33页 |
| 3.1 结论 | 第31-32页 |
| 3.2 讨论 | 第32-33页 |
| 第四章 致病缺陷性突变体筛选及初步研究 | 第33-47页 |
| 1 材料和方法 | 第33-35页 |
| 1.1 材料 | 第33页 |
| 1.1.1 菌株 | 第33页 |
| 1.1.2 拟南芥植株及培养材料 | 第33页 |
| 1.1.3 培养基、缓冲液及其它试剂 | 第33页 |
| 1.1.4 酶、试剂盒及其它试剂 | 第33页 |
| 1.1.5 引物 | 第33页 |
| 1.2 方法 | 第33-35页 |
| 1.2.1 拟南芥室内种植 | 第33-34页 |
| 1.2.2 分生孢子萌发显微观察 | 第34页 |
| 1.2.3 孢子悬浮液接种拟南芥及观察侵染过程 | 第34页 |
| 1.2.4 转化子PCR鉴定与Southern杂交分析 | 第34-35页 |
| 2 结果与分析 | 第35-45页 |
| 2.1 致病缺陷性突变体生物学特性研究 | 第35-37页 |
| 2.2 分生孢子萌发显微观察 | 第37-39页 |
| 2.3 拟南芥叶片染色观察侵染过程 | 第39-43页 |
| 2.4 转化子PCR鉴定 | 第43-44页 |
| 2.5 转化子Southern杂交分析 | 第44-45页 |
| 3 结论与讨论 | 第45-47页 |
| 3.1 结论 | 第45-46页 |
| 3.1.1 分生孢子萌发显微观察 | 第45页 |
| 3.1.2 拟南芥叶片染色观察侵染过程 | 第45-46页 |
| 3.1.3 转化子PCR鉴定及Southern杂交分析 | 第46页 |
| 3.2 讨论 | 第46-47页 |
| 结论与展望 | 第47-48页 |
| 附录 | 第48-50页 |
| 参考文献 | 第50-55页 |
| 致谢 | 第55页 |
