| 摘要 | 第5-6页 |
| abstract | 第6页 |
| 主要符号表 | 第11-12页 |
| 第一部分：文献综述 | 第12-22页 |
| 1.1 手性药物 | 第12页 |
| 1.2 邻氯扁桃酸 | 第12-14页 |
| 1.2.1 邻氯扁桃酸简介 | 第12-13页 |
| 1.2.2 (R)-邻氯扁桃酸的用途 | 第13-14页 |
| 1.3 (R)-邻氯扁桃酸的制备方法 | 第14-16页 |
| 1.3.1 光学异构体拆分法 | 第14-15页 |
| 1.3.2 化学合成法 | 第15页 |
| 1.3.3 不对称还原法 | 第15页 |
| 1.3.4 生物催化法 | 第15-16页 |
| 1.4 腈化合物 | 第16-17页 |
| 1.5 腈水解酶 | 第17-20页 |
| 1.5.1 腈水解酶的简介 | 第17页 |
| 1.5.2 腈水解酶的水解机理 | 第17-18页 |
| 1.5.3 腈水解酶的应用 | 第18-20页 |
| 1.6 腈水解酶制备(R)-邻氯扁桃酸 | 第20-21页 |
| 1.7 本研究的目的及意义 | 第21-22页 |
| 第二部分：材料与方法 | 第22-38页 |
| 2.1 材料 | 第22-25页 |
| 2.1.1 主要试剂 | 第22页 |
| 2.1.2 仪器及相关设备 | 第22-23页 |
| 2.1.3 本实验所用的菌株和质粒 | 第23页 |
| 2.1.4 实验所用的培养基 | 第23页 |
| 2.1.5 实验所用的主要溶液及其配制方法 | 第23-25页 |
| 2.2 方法 | 第25-38页 |
| 2.2.1 大肠杆菌感受态的制备及其转化方法 | 第25-26页 |
| 2.2.2 质粒的提取方法 | 第26-28页 |
| 2.2.3 分析方法 | 第28-30页 |
| 2.2.4 腈水解酶酶活的测定 | 第30页 |
| 2.2.5 蛋白质含量测定 | 第30-31页 |
| 2.2.6 重组质粒的构建 | 第31-33页 |
| 2.2.7 腈水解酶的大肠杆菌表达 | 第33页 |
| 2.2.8 聚丙烯酰胺凝胶电泳检测蛋白 | 第33-34页 |
| 2.2.9 腈水解酶的活力和选择性筛选 | 第34页 |
| 2.2.10 Western-Blot检测目的蛋白的表达 | 第34-35页 |
| 2.2.11 蛋白质的纯化 | 第35页 |
| 2.2.12 反应条件的优化 | 第35-36页 |
| 2.2.13 利用腈水解酶制备(R)-邻氯扁桃酸 | 第36-38页 |
| 第三部分：结果与分析 | 第38-47页 |
| 3.1 重组质粒的构建 | 第38页 |
| 3.2 腈水解酶在大肠杆菌中的表达 | 第38-40页 |
| 3.3 腈水解酶酶活力和选择性的测定 | 第40页 |
| 3.4 反应条件的优化的结果 | 第40-44页 |
| 3.4.1 EDTA和不同金属离子对LaN活性的影响 | 第40-41页 |
| 3.4.2 转化反应菌体量的确定 | 第41-42页 |
| 3.4.3 底物浓度对 LaN 重组大肠杆菌活性的影响 | 第42页 |
| 3.4.4 LaN重组大肠杆菌的最适反应温度和温度的稳定性 | 第42-43页 |
| 3.4.5 pH 对 LaN 重组大肠杆菌活性的影响 | 第43-44页 |
| 3.5 分批补料制备 (R)-邻氯扁桃酸 | 第44-47页 |
| 3.5.1 高密度发酵 | 第44-45页 |
| 3.5.2 分批补料反应 | 第45页 |
| 3.5.3 (R)-邻氯扁桃酸的结晶纯化 | 第45-46页 |
| 3.5.4 HPLC测定(R)-邻氯扁桃酸 | 第46-47页 |
| 第四部分：总结与展望 | 第47-50页 |
| 4.1 总结 | 第47-48页 |
| 4.2 展望 | 第48页 |
| 4.3 结论 | 第48-50页 |
| 参考文献 | 第50-55页 |
| 致谢 | 第55页 |
