| 中文摘要 | 第3-5页 |
| Abstract | 第5-6页 |
| 第1章 绪论 | 第11-36页 |
| 1.1 燃料乙醇研究生产的意义 | 第11-12页 |
| 1.2 木质纤维素生产燃料乙醇 | 第12-14页 |
| 1.3 微生物的木糖代谢 | 第14-19页 |
| 1.3.1 木糖代谢菌种 | 第15-16页 |
| 1.3.2 木糖发酵生产乙醇 | 第16-17页 |
| 1.3.3 微生物的木糖代谢途径 | 第17-19页 |
| 1.4 酿酒酵母木糖代谢工程菌 | 第19-28页 |
| 1.4.1 酿酒酵母生产乙醇的优良特性 | 第20-21页 |
| 1.4.2 酿酒酵母中木糖代谢途径的建立 | 第21-25页 |
| 1.4.3 工程菌木糖下游代谢途径改造 | 第25-26页 |
| 1.4.4 原生质体融合构建木糖发酵工程菌 | 第26-27页 |
| 1.4.5 木糖代谢产乙醇的其它代谢工程 | 第27-28页 |
| 1.5 木糖产乙醇其它工程菌 | 第28-30页 |
| 1.6 酿酒酵母工程菌株构建策略 | 第30-33页 |
| 1.7 本研究的目的及意义 | 第33-35页 |
| 1.8 本研究的主要技术路线 | 第35-36页 |
| 第2章 材料与方法 | 第36-63页 |
| 2.1 试验材料 | 第36-43页 |
| 2.1.1 供试菌种及质粒 | 第36-38页 |
| 2.1.2 培养基及培养条件 | 第38页 |
| 2.1.3 PCR 扩增引物 | 第38-39页 |
| 2.1.4 主要生化及分子生物学试剂 | 第39-40页 |
| 2.1.5 主要试剂及其配制方法 | 第40-42页 |
| 2.1.6 主要仪器设备 | 第42-43页 |
| 2.2 试验方法 | 第43-63页 |
| 2.2.1 G418 最低抑菌浓度的测定 | 第43页 |
| 2.2.2 质粒载体构建元件扩增模板 | 第43-45页 |
| 2.2.3 重组质粒载体构建元件的克隆 | 第45-52页 |
| 2.2.4 酿酒酵母高拷贝整合表达载体构建 | 第52-58页 |
| 2.2.5 重组质粒载体转化酿酒酵母 | 第58-59页 |
| 2.2.6 重组酿酒酵母的筛选与鉴定 | 第59页 |
| 2.2.7 木酮糖激酶酶活测定 | 第59-62页 |
| 2.2.8 重组菌的稳定性测定 | 第62-63页 |
| 第3章 结果与分析 | 第63-92页 |
| 3.1 G418 的最低抑菌浓度 | 第63页 |
| 3.1.1 G418 对W5 的最低抑菌浓度 | 第63页 |
| 3.1.2 G418 对E.coli DH5α的最低抑菌浓度 | 第63页 |
| 3.2 酿酒酵母基因组DNA 的提取 | 第63-64页 |
| 3.3 重组质粒载体构建元件的克隆 | 第64-73页 |
| 3.3.1 G418 抗性基因KanR 基因的克隆 | 第64-66页 |
| 3.3.2 XKS1 基因的克隆 | 第66-69页 |
| 3.3.3 ADH1 终止子片段的克隆 | 第69-71页 |
| 3.3.4 2.2kb rDNA 片段的克隆 | 第71-73页 |
| 3.4 重组酿酒酵母高拷贝整合表达载体的构建 | 第73-84页 |
| 3.4.1 质粒pCXS-R 的构建及筛选鉴定 | 第73-76页 |
| 3.4.2 质粒pCXS-RK 的构建及筛选鉴定 | 第76-78页 |
| 3.4.3 质粒pCXS-RKT 的构建及筛选鉴定 | 第78-82页 |
| 3.4.4 质粒pCXS-RKTr 的构建及筛选鉴定 | 第82-84页 |
| 3.5 重组酿酒酵母菌的筛选鉴定 | 第84-87页 |
| 3.5.1 重组酿酒酵母菌的筛选 | 第84-85页 |
| 3.5.2 高拷贝重组酿酒酵母菌株的筛选 | 第85-86页 |
| 3.5.3 质粒载体整合重组菌的鉴定 | 第86-87页 |
| 3.6 重组酿酒酵母的木酮糖激酶酶活 | 第87-91页 |
| 3.6.1 重组菌的粗酶液蛋白浓度 | 第87-88页 |
| 3.6.2 重组酿酒酵母的木酮糖激酶酶活 | 第88-91页 |
| 3.7 重组酿酒酵母的稳定性 | 第91-92页 |
| 第4章 讨论 | 第92-100页 |
| 4.1 宿主菌的选择 | 第92页 |
| 4.2 酿酒酵母工业菌株筛选标记 | 第92-93页 |
| 4.3 重组质粒载体构建骨架 | 第93-94页 |
| 4.4 载体构建中酶切位点分析与选择 | 第94-95页 |
| 4.5 重组质粒载体同源重组位点 | 第95-96页 |
| 4.6 酵母工业菌株转化方法的选择 | 第96页 |
| 4.7 转化子的稳定性 | 第96-97页 |
| 4.8 木酮糖激酶酶活的测定 | 第97-98页 |
| 4.9 重组质粒载体 XKS1 的表达 | 第98页 |
| 4.10 工作设想 | 第98-100页 |
| 第5章 结论 | 第100-102页 |
| 参考文献 | 第102-111页 |
| 附录1 | 第111-113页 |
| 附录2 | 第113-115页 |
| 附录3 | 第115-117页 |
| 附录4 | 第117-120页 |
| 附录5 | 第120-122页 |
| 附录6 | 第122页 |
| 附录7 | 第122-123页 |
| 致谢 | 第123页 |
