| 中文摘要 | 第5-7页 |
| ABSTRACT | 第7-8页 |
| 1. 文献综述 | 第12-29页 |
| 1.1 大鲵病害研究概况 | 第12-14页 |
| 1.1.1 大鲵养殖现状 | 第12页 |
| 1.1.2 大鲵常见疾病 | 第12-14页 |
| 1.2 蛙病毒概述 | 第14-20页 |
| 1.2.1 蛙病毒的生物学性状 | 第15-16页 |
| 1.2.2 蛙病毒感染的分布与危害 | 第16页 |
| 1.2.3 蛙病毒感染的感染机制 | 第16-17页 |
| 1.2.4 蛙病毒感染的病理学变化 | 第17-19页 |
| 1.2.5 蛙病毒感染的诊断与防治 | 第19-20页 |
| 1.3 环介导的核酸等温扩增(LAMP)检测技术 | 第20-29页 |
| 1.3.1 LAMP技术 | 第20页 |
| 1.3.2 LAMP技术引物设计的基本原理 | 第20-21页 |
| 1.3.3 LAMP技术的原理 | 第21-24页 |
| 1.3.4 LAMP产物的检测 | 第24-26页 |
| 1.3.5 LAMP技术的优点 | 第26页 |
| 1.3.6 LAMP技术的缺点 | 第26页 |
| 1.3.7 LAMP技术的运用 | 第26-29页 |
| 1.4 研究目的与意义 | 第29页 |
| 2. 材料 | 第29-32页 |
| 2.1 病毒来源 | 第29页 |
| 2.2 主要试剂与耗材 | 第29-30页 |
| 2.3 主要试剂配制方法 | 第30-32页 |
| 3 试验方法 | 第32-39页 |
| 3.1 大鲵蛙病毒LAMP技术引物设计 | 第32页 |
| 3.2 大鲵蛙病毒的细胞培养 | 第32-33页 |
| 3.3 大鲵蛙病毒总基因组DNA的提取 | 第33-34页 |
| 3.4 大鲵蛙病毒普通PCR和巢氏PCR引物的设计 | 第34页 |
| 3.5 大鲵蛙病毒巢氏PCR的扩增 | 第34页 |
| 3.6 构建目标序列质粒 | 第34-37页 |
| 3.6.1 PCR扩增片段的胶回收、连接、转化和鉴定 | 第34-35页 |
| 3.6.2 E.coli DH5 α感受态细胞的制备 | 第35页 |
| 3.6.3 重组质粒的连接 | 第35页 |
| 3.6.4 E.coli DH5 α感受态细胞的转化 | 第35-36页 |
| 3.6.5 重组质粒阳性克隆的筛选 | 第36页 |
| 3.6.6 重组质粒的提取和鉴定 | 第36-37页 |
| 3.7 CGSRV LAMP扩增体系及条件优化 | 第37-38页 |
| 3.7.1 LAMP反应体系中Tm值的优化 | 第37页 |
| 3.7.2 LAMP反应体系中反应时间的优化 | 第37页 |
| 3.7.3 LAMP反应体系中Mg~(2+)浓度的优化 | 第37页 |
| 3.7.4 LAMP反应体系中dNTPs浓度的优化 | 第37页 |
| 3.7.5 LAMP反应体系中引物浓度的优化 | 第37-38页 |
| 3.7.6 LAMP反应体系中Bst DNA聚合酶浓度的优化 | 第38页 |
| 3.8 LAMP检测方法特异性的检测 | 第38页 |
| 3.9 LAMP检测方法灵敏度的检测 | 第38页 |
| 3.10 不同加热方式对LAMP试验的影响 | 第38-39页 |
| 3.11 LAMP在快速检测大鲵蛙病毒中的运用 | 第39页 |
| 4 实验结果 | 第39-52页 |
| 4.1 大鲵蛙病毒的细胞培养 | 第39页 |
| 4.2 大鲵蛙病毒巢氏PCR的扩增 | 第39-41页 |
| 4.3 PCR鉴定与序列测定 | 第41-42页 |
| 4.4 CGSRV LAMP扩增体系及条件优化 | 第42-48页 |
| 4.4.1 LAMP反应体系中Tm值的优化 | 第42-43页 |
| 4.4.2 LAMP反应体系中反应时间的优化 | 第43-44页 |
| 4.4.3 LAMP反应体系中Mg~(2+)浓度的优化 | 第44-45页 |
| 4.4.4 LAMP反应体系中dNTPs浓度的优化 | 第45-46页 |
| 4.4.5 LAMP反应体系中引物浓度的优化 | 第46-47页 |
| 4.4.6 LAMP反应体系中Bst DNA聚合酶浓度的优化 | 第47-48页 |
| 4.5 LAMP检测方法特异性的检测 | 第48-49页 |
| 4.6 LAMP检测方法灵敏度的检测 | 第49-51页 |
| 4.7 不同加热方式对LAMP试验的影响 | 第51页 |
| 4.8 LAMP在快速检测大鲵蛙病毒中的运用 | 第51-52页 |
| 5 讨论 | 第52-57页 |
| 5.1 大鲵蛙病毒的危害与诊断 | 第52-54页 |
| 5.2 LAMP检测方法的优势与运用 | 第54-55页 |
| 5.3 LAMP检测方法的假阳性问题 | 第55-56页 |
| 5.4 LAMP检测方法的影响因素 | 第56-57页 |
| 5.4.1 LAMP引物 | 第56页 |
| 5.4.2 LAMP反应中Mg~(2+)浓度和温度的影响 | 第56-57页 |
| 6. 结论 | 第57-59页 |
| 参考文献 | 第59-65页 |
| 致谢 | 第65-66页 |
| 作者攻读硕士学位期间发表的学术论文 | 第66页 |
