| 摘要 | 第4-6页 |
| ABSTRACT | 第6-7页 |
| 引言 | 第11-12页 |
| 1 文献综述 | 第12-21页 |
| 1.1 植物非生物逆境胁迫分子机制研究现状 | 第12-17页 |
| 1.1.1 渗透调节物质的合成与积累 | 第12页 |
| 1.1.2 非生物胁迫下的基因调控 | 第12-15页 |
| 1.1.2.1 ABA依赖途径 | 第14-15页 |
| 1.1.2.2 非ABA依赖途径 | 第15页 |
| 1.1.3 逆境相关转录因子研究 | 第15-17页 |
| 1.2 锌指蛋白在非生物逆境胁迫中的作用 | 第17-20页 |
| 1.2.1 锌指蛋白概念、结构和分类 | 第17-18页 |
| 1.2.2 锌指蛋白研究进展 | 第18-20页 |
| 1.2.2.1 参与低温胁迫响应过程 | 第18-19页 |
| 1.2.2.2 参与高盐和干旱胁迫响应 | 第19页 |
| 1.2.2.3 调控植物生长发育 | 第19-20页 |
| 1.3 桉树抗逆相关基因研究现状 | 第20页 |
| 1.4 研究目的和意义 | 第20-21页 |
| 2 EgrZFP7蛋白序列及其共表达基因分析 | 第21-30页 |
| 2.1 方法与步骤 | 第21-22页 |
| 2.1.1 EgrZFP7蛋白序列分析 | 第21页 |
| 2.1.1.1 EgrZFP7基因编码蛋白保守域分析 | 第21页 |
| 2.1.1.2 EgrZFP7蛋白进化树分析 | 第21页 |
| 2.1.2 EgrZFP7启动子顺式作用元件分析 | 第21页 |
| 2.1.3 4℃低温处理下EgrZFP7共表达基因分析 | 第21-22页 |
| 2.2 结果与分析 | 第22-27页 |
| 2.2.1 EgrZFP7蛋白序列分析 | 第22-23页 |
| 2.2.2 EgrZFP7启动子顺式作用元件分析 | 第23-25页 |
| 2.2.3 EgrZFP7共表达基因分析 | 第25-27页 |
| 2.2.3.1 EgrZFP7共表达基因KEGG分析 | 第25-26页 |
| 2.2.3.2 EgrZFP7共表达基因分析 | 第26-27页 |
| 2.3 讨论 | 第27-30页 |
| 3 EgrZFP7转基因拟南芥功能分析 | 第30-47页 |
| 3.1 材料与方法 | 第30-41页 |
| 3.1.1 材料与仪器 | 第30页 |
| 3.1.1.1 植物材料 | 第30页 |
| 3.1.1.2 试剂与仪器 | 第30页 |
| 3.1.2 巨桉RNA提取和cDNA第一链合成 | 第30-32页 |
| 3.1.2.1 RNA提取材料准备 | 第30页 |
| 3.1.2.2 巨桉RNA提取 | 第30-31页 |
| 3.1.2.3 巨桉cDNA第一链合成 | 第31-32页 |
| 3.1.3 EgrZFP7::35S超表达载体构建 | 第32-37页 |
| 3.1.3.1 EgrZFP7全长序列扩增 | 第32-33页 |
| 3.1.3.2 基因目的条带凝胶回收 | 第33-34页 |
| 3.1.3.3 目的基因和空载载体质粒双酶切 | 第34页 |
| 3.1.3.4 双酶切产物纯化 | 第34页 |
| 3.1.3.5 目的基因与空载质粒连接 | 第34-35页 |
| 3.1.3.6 重组质粒转化 | 第35-36页 |
| 3.1.3.7 重组质粒鉴定和分析 | 第36页 |
| 3.1.3.8 重组质粒质粒抽提 | 第36-37页 |
| 3.1.4 重组质粒转化农杆菌和拟南芥的遗传转化 | 第37-38页 |
| 3.1.4.1 重组质粒电击转化农杆菌 | 第37-38页 |
| 3.1.4.2 重组质粒农杆菌鉴定 | 第38页 |
| 3.1.4.3 农杆菌重组质粒遗传转化拟南芥 | 第38页 |
| 3.1.5 EgrZFP7纯合植株筛选 | 第38-40页 |
| 3.1.6 超表达EgrZFP7拟南芥低温、盐和PEG处理 | 第40-41页 |
| 3.2 结果与分析 | 第41-45页 |
| 3.2.1 EgrZFP7::35S超表达载体构建和鉴定 | 第41-42页 |
| 3.2.2 转基因拟南芥阳性植株鉴定 | 第42-43页 |
| 3.2.3 EgrZFP7转基因和野生型拟南芥盐、干旱和低温处理表型 | 第43-45页 |
| 3.2.3.1 野生型和转基因株系拟南芥表型 | 第43页 |
| 3.2.3.2 盐和PEG处理下野生型和转基因株系拟南芥表型 | 第43-45页 |
| 3.2.3.3 低温处理下野生型和转基因拟南芥表型 | 第45页 |
| 3.3 讨论 | 第45-47页 |
| 4 锌指蛋白EgrZFP7的表达和纯化 | 第47-59页 |
| 4.1 材料与方法 | 第47-54页 |
| 4.1.1 试剂与仪器 | 第47-48页 |
| 4.1.2 EgrZFP7原核表达载体构建 | 第48-49页 |
| 4.1.2.1 EgrZFP7全长序列扩增 | 第48页 |
| 4.1.2.2 基因目的条带凝胶回收 | 第48-49页 |
| 4.1.2.3 目的基因和空载载体质粒双酶切 | 第49页 |
| 4.1.2.4 双酶切产物纯化 | 第49页 |
| 4.1.2.6 重组质粒转化 | 第49页 |
| 4.1.2.7 重组质粒鉴定和分析 | 第49页 |
| 4.1.2.8 重组质粒质粒抽提 | 第49页 |
| 4.1.3 锌指蛋白EgrZFP7的表达 | 第49-53页 |
| 4.1.3.1 重组质粒双酶切鉴定 | 第49-50页 |
| 4.1.3.2 重组质粒表达感受态细胞转化和鉴定 | 第50页 |
| 4.1.3.3 EgrZFP7的表达 | 第50-53页 |
| 4.1.4 EgrZFP7蛋白的纯化 | 第53-54页 |
| 4.2 结果与分析 | 第54-57页 |
| 4.2.1 EgrZFP7原核表达载体构建和鉴定 | 第54页 |
| 4.2.2 EgrZFP7原核表达重组质粒鉴定 | 第54-55页 |
| 4.2.3 EgrZFP7蛋白的表达 | 第55-56页 |
| 4.2.4 EgrZFP7蛋白的纯化 | 第56-57页 |
| 4.3 讨论 | 第57-59页 |
| 5 EgrZFP7核心结合序列筛选 | 第59-65页 |
| 5.1 材料与方法 | 第59-61页 |
| 5.1.1 EgrZFP7蛋白结合核心序列搜索 | 第59-61页 |
| 5.1.1.1 试剂与仪器 | 第59页 |
| 5.1.1.2 EgrZFP7蛋白结合核心序列筛选 | 第59-61页 |
| 5.2 结果与分析 | 第61-63页 |
| 5.2.1 EgrZFP7蛋白结合核心序列筛选 | 第61-62页 |
| 5.2.1.1 CASTing结合底物准备 | 第61-62页 |
| 5.2.1.2 结合核心序列筛选 | 第62页 |
| 5.2.2 EgrZFP7蛋白结合核心序列分析 | 第62-63页 |
| 5.3 讨论 | 第63-65页 |
| 6 结论 | 第65-66页 |
| 参考文献 | 第66-75页 |
| 个人简介 | 第75页 |
| 论文发表情况 | 第75-76页 |
| 致谢 | 第76页 |
