| 摘要 | 第10-13页 |
| ABSTRACT | 第13-17页 |
| 第一章 文献综述 | 第18-30页 |
| 1.1 植物B营养概述 | 第19-27页 |
| 1.1.1 植物对B的吸收、转运与再分配 | 第19-20页 |
| 1.1.2 B在植物细胞内的分布 | 第20-21页 |
| 1.1.3 B的生物学功能 | 第21-24页 |
| 1.1.4 植物B毒害的发生与耐B毒机理 | 第24-27页 |
| 1.2 柑橘B毒害研究进展 | 第27-29页 |
| 1.3 本研究的意义 | 第29-30页 |
| 第二章 B毒害处理对柑橘根、叶显微结构以及体内B分布的影响 | 第30-50页 |
| 2.1 材料与方法 | 第30-32页 |
| 2.1.1 柑橘实生苗培养与B毒害处理 | 第30-31页 |
| 2.1.2 植株的生物量测定 | 第31页 |
| 2.1.3 B与叶绿素含量测定 | 第31页 |
| 2.1.4 BOR1、NIP5;1和BOR4的半定量qPCR分析 | 第31-32页 |
| 2.1.5 气体交换指标、叶绿素荧光测定 | 第32页 |
| 2.1.6 显微观察与形态指标测定 | 第32页 |
| 2.1.7 实验设计与统计分析 | 第32页 |
| 2.2 结果与分析 | 第32-46页 |
| 2.2.1 B毒害对柑橘生物量的影响 | 第32-33页 |
| 2.2.2 B毒害对叶绿素含量、总B含量、B分布的影响 | 第33-36页 |
| 2.2.3 B毒害对叶片BOR1、NIP5;1和BOR4相对表达量的影响 | 第36页 |
| 2.2.4 B毒害对叶片气体交换、荧光参数的影响 | 第36-38页 |
| 2.2.5 B毒害对柑橘根、叶解剖结构的影响 | 第38-40页 |
| 2.2.6 B毒害对柑橘根、叶超微结构的影响 | 第40-46页 |
| 2.3 讨论 | 第46-49页 |
| 2.3.1 B毒害对柑橘植株生长的影响 | 第46页 |
| 2.3.2 B毒害对柑橘根、叶显微结构的影响 | 第46-48页 |
| 2.3.3 柑橘中B的吸收与转运 | 第48页 |
| 2.3.4 柑橘耐受B毒害的可能机制 | 第48-49页 |
| 2.4 小结 | 第49-50页 |
| 第三章 柑橘叶片miRNA对B毒害的响应 | 第50-68页 |
| 3.1 材料与方法 | 第51-52页 |
| 3.1.1 试验材料及其培养和B毒害处理 | 第51页 |
| 3.1.2 RNA提取与质量检测 | 第51页 |
| 3.1.3 柑橘小RNA文库构建与Solexa测序 | 第51页 |
| 3.1.4 小RNA文库序列分析与miRNA预测 | 第51页 |
| 3.1.5 miRNA差异表达分析 | 第51页 |
| 3.1.6 靶基因预测 | 第51-52页 |
| 3.1.7 靶基因的GO分析 | 第52页 |
| 3.1.8 茎环结构法检测miRNA表达量 | 第52页 |
| 3.1.9 靶基因的表达量分析 | 第52页 |
| 3.1.10 靶基因剪切产物5'-RACE验证 | 第52页 |
| 3.1.11 细胞壁多糖的细胞化学分析 | 第52页 |
| 3.2 结果与分析 | 第52-63页 |
| 3.2.1 B毒害对植株的影响 | 第52-53页 |
| 3.2.2 小RNA文库测序结果的初步分析 | 第53-54页 |
| 3.2.3 保守与非保守miRNA的鉴定及生物信息学分析 | 第54-57页 |
| 3.2.4 B毒害胁迫下的miRNA差异表达分析 | 第57-58页 |
| 3.2.5 差异表达miRNA的qRT-PCR验证 | 第58-59页 |
| 3.2.6 差异表达miRNA靶基因的预测与GO分析 | 第59-60页 |
| 3.2.7 候选靶基因的qRT-PCR分析 | 第60-61页 |
| 3.2.8 柑橘miRNA剪切靶基因的RLM-RACE验证 | 第61-62页 |
| 3.2.9 miR397a表达量改变引起柑橘叶脉细胞壁次生沉积 | 第62-63页 |
| 3.3 讨论 | 第63-67页 |
| 3.3.1 柑橘miRNA的序列多样性 | 第64页 |
| 3.3.2 miRNA与其靶基因的互作 | 第64-65页 |
| 3.3.3 miRNA对B毒害的响应 | 第65-66页 |
| 3.3.4 柑橘叶片的可能耐B毒机制 | 第66-67页 |
| 3.4 小结 | 第67-68页 |
| 第四章 B毒害响应miR397a靶向LACs调控木质素次生合成对维管组织B转运的影响 | 第68-94页 |
| 4.1 材料与方法 | 第68-71页 |
| 4.1.1 试验材料及其培养和B毒害处理 | 第68页 |
| 4.1.2 miR397a及其靶基因的克隆与序列分析 | 第68-69页 |
| 4.1.3 木质素代谢相关基因的qRT-PCR检测 | 第69页 |
| 4.1.4 细胞壁主要成分的含量检测 | 第69-70页 |
| 4.1.5 木质素的细胞化学定位 | 第70页 |
| 4.1.6 miR397a及其靶基因的原位表达分析 | 第70页 |
| 4.1.7 次生木质素转运途径的亚细胞分析 | 第70页 |
| 4.1.8 自由态B和结合态B的检测 | 第70页 |
| 4.1.9 B的原位检测 | 第70-71页 |
| 4.1.10 试验设计和统计分析 | 第71页 |
| 4.2 结果与分析 | 第71-87页 |
| 4.2.1 miR397a的5'-RACE克隆与序列分析 | 第71-73页 |
| 4.2.2 LAC4、LAC17的ORF全长克隆与序列分析 | 第73-75页 |
| 4.2.3 B毒害对柑橘叶片细胞壁主要成分含量的影响 | 第75-76页 |
| 4.2.4 B毒害对柑橘叶片漆酶家族基因表达的影响 | 第76-78页 |
| 4.2.5 B毒害对柑橘叶片木质素细胞化学的影响 | 第78-79页 |
| 4.2.6 miR397a及其靶基因的原位表达分析 | 第79-81页 |
| 4.2.7 B毒害柑橘叶脉次生木质素合成与转运途径的亚细胞定位 | 第81-83页 |
| 4.2.8 B毒害对柑橘叶片不同结合态B含量的影响 | 第83-84页 |
| 4.2.9 B毒害对柑橘叶片主脉中~(11)B和~(13)C空间分布的影响 | 第84-87页 |
| 4.3 讨论 | 第87-93页 |
| 4.3.1 miR397a的转录、加工及其与靶基因的互作 | 第87-88页 |
| 4.3.2 miR397a靶向LACs对维管细胞壁木质素次生合成的调控 | 第88-89页 |
| 4.3.3 木质素的细胞壁转运与聚合 | 第89-90页 |
| 4.3.4 木质素次生合成对B转运的影响 | 第90-91页 |
| 4.3.5 基于木质素次生合成的柑橘耐B毒机制 | 第91-92页 |
| 4.3.6 LA-ICP-MS技术的优缺点 | 第92-93页 |
| 4.4 小结 | 第93-94页 |
| 第五章 柑橘根尖miRNA对B毒害的响应 | 第94-109页 |
| 5.1 材料与方法 | 第94-96页 |
| 5.1.1 试验材料 | 第94页 |
| 5.1.2 RNA提取与质量检测 | 第94页 |
| 5.1.3 根尖小RNA文库构建与高通量测序 | 第94-95页 |
| 5.1.4 测序数据质量控制与sRNA分类注释 | 第95页 |
| 5.1.5 miRNA表达量分析 | 第95页 |
| 5.1.6 miRNA靶基因预测 | 第95页 |
| 5.1.7 miRNA靶基因注释与GO分析 | 第95页 |
| 5.1.8 差异表达miRNA的stem-loop qRT-PCR验证 | 第95页 |
| 5.1.9 候选靶基因的表达量分析 | 第95-96页 |
| 5.1.10 靶基因剪切产物5'-RACE验证 | 第96页 |
| 5.2 结果与分析 | 第96-104页 |
| 5.2.1 B毒害处理对柑橘根系的影响 | 第96页 |
| 5.2.2 高通量测序结果的初步分析 | 第96-98页 |
| 5.2.3 B毒害胁迫下的根尖miRNA差异表达分析 | 第98-99页 |
| 5.2.4 差异表达miRNA靶基因的预测与GO分析 | 第99-101页 |
| 5.2.5 差异表达miRNA的stem-loop qRT-PCR验证 | 第101页 |
| 5.2.6 候选靶基因的qRT-PCR分析 | 第101-102页 |
| 5.2.7 miRNA剪切靶基因RLM-5'-RACE的验证 | 第102-104页 |
| 5.2.8 Ciclev10000756m.g.v1.0编码蛋白的生物信息学初步分析 | 第104页 |
| 5.3 讨论 | 第104-108页 |
| 5.3.1 柑橘miRNA响应B毒害的组织特异性 | 第105页 |
| 5.3.2 miRNA与靶基因的互作 | 第105-106页 |
| 5.3.3 根尖miRNA对B毒害的响应 | 第106-107页 |
| 5.3.4 柑橘根系对长期B毒害的适应性调节 | 第107-108页 |
| 5.4 小结 | 第108-109页 |
| 第六章 结论 | 第109-110页 |
| 参考文献 | 第110-129页 |
| 攻读博士学位期间发表的学术论文 | 第129-130页 |
| 致谢 | 第130-131页 |
| 附录 | 第131-187页 |
| Supplementary Table 3-1 | 第131-132页 |
| Supplementary Table 3-2 | 第132-133页 |
| Supplementary Table 3-3 | 第133-134页 |
| Supplementary Dataset 3-S1 | 第134-162页 |
| Supplementary Dataset 3-S2 | 第162-165页 |
| Supplementary Dataset 3-S3 | 第165-170页 |
| Supplementary Table 4-1 | 第170页 |
| Supplementary Table 4-2 | 第170-171页 |
| Supplementary Table 4-3 | 第171页 |
| Supplementry Fig.4-1 | 第171-172页 |
| Supplementry Fig.4-2 | 第172-173页 |
| Supplementry Fig.4-3 | 第173-174页 |
| Supplementry Fig. 4-4 | 第174-175页 |
| Supplementary Table 5-1 | 第175-176页 |
| Supplementary Table 5-2 | 第176页 |
| Supplementary Table 5-3 | 第176-177页 |
| Supplementary Dataset 5-S1 | 第177-184页 |
| Supplementary Dataset 5-S2 | 第184-186页 |
| Supplementary Dataset 5-S3 | 第186-187页 |
