| 摘要 | 第6-9页 |
| Abstract | 第9-12页 |
| 前言 | 第13-18页 |
| 第一部分 GIPR~(dn)表达质粒的构建 | 第18-27页 |
| 材料和方法 | 第18-21页 |
| 一、GIPR~(dn)质粒构造的思路 | 第18-19页 |
| 二、GIPR~(dn)质粒序列的合成 | 第19页 |
| 三、In-fusion法重组质粒的构建 | 第19-21页 |
| 结果 | 第21-25页 |
| 一、改造后的GIPR~(dn)cDNA序列 | 第21-22页 |
| 二、设计用于in-fusion重组体系的引物 | 第22页 |
| 三、in-fusion引物PCR扩增目的片段 | 第22页 |
| 四、重组pNUM103质粒鉴定 | 第22-23页 |
| 五、将构建的pNMU103质粒线性化 | 第23-25页 |
| 讨论 | 第25-27页 |
| 第二部分 GIPR~(dn)转基因猪的建立 | 第27-41页 |
| 材料和方法 | 第27-35页 |
| 一、转染质粒的制备 | 第27-31页 |
| 二、雄性的猪胎儿成纤维细胞选择 | 第31页 |
| 三、G418对猪胎儿成纤维细胞筛选试验 | 第31-32页 |
| 四、质粒的转染 | 第32页 |
| 五、转染的阳性细胞的筛选 | 第32-33页 |
| 六、转染的阳性细胞的鉴定 | 第33-34页 |
| 七、体细胞核移植以及胚胎移植 | 第34-35页 |
| 结果 | 第35-40页 |
| 一、线性化质粒pNMU103的获得 | 第35-36页 |
| 二、雄性猪胎儿成纤维细胞的获得 | 第36页 |
| 三、G418对猪胎儿成纤维细胞的筛选实验 | 第36-37页 |
| 四、GIPR~(dn)猪转基因成纤维细胞的获得 | 第37-38页 |
| 五、转染质粒pNMU103的猪胎儿成纤维细胞的PCR鉴定 | 第38页 |
| 六、核移植与胚胎移植 | 第38-39页 |
| 七、7只转基因猪出生 | 第39-40页 |
| 讨论 | 第40-41页 |
| 第三部分 GIPR~(dn)转基因猪表型分析 | 第41-68页 |
| 材料和方法 | 第41-51页 |
| 一、猪的饲养与管理 | 第41页 |
| 二、猪的基因型鉴定 | 第41-42页 |
| 三、口服葡萄糖耐量(OGTT) | 第42-43页 |
| 四、胰岛素测定 | 第43-44页 |
| 五、猪的胰腺分离与称重 | 第44-45页 |
| 六、GIPR~(dn)的表达测定 | 第45-47页 |
| 七、胰腺的组织学分析-石蜡包埋 | 第47-48页 |
| 八、胰腺的组织学分析-切片 | 第48-49页 |
| 九、胰腺的组织学分析-免疫组化 | 第49-50页 |
| 十、统计学处理 | 第50-51页 |
| 结果 | 第51-63页 |
| 一、7只GIPR~(dn)转基因猪基因型鉴定 | 第51页 |
| 二、GIPR~(dn)转基因猪和正常对照组在2M和5M血糖比较 | 第51-54页 |
| 三、GIPR~(dn)转基因猪和正常对照组在2M和5M胰岛素比较 | 第54-56页 |
| 四、GIPR~(dn)转基因猪在2M和5M口服葡萄糖耐量试验中血糖、胰岛素分泌总量的比较 | 第56-58页 |
| 五、分离GIPR~(dn)转基因猪胰腺的比较 | 第58-59页 |
| 六、GIPR~(dn)转基因猪胰腺的GIPR~(dn)的表达 | 第59-60页 |
| 七、GIPR~(dn)转基因猪胰腺形态学改变 | 第60-63页 |
| 讨论 | 第63-68页 |
| 小结 | 第68-70页 |
| 缩略语 | 第70-71页 |
| 参考文献 | 第71-79页 |
| 综述1 | 第79-94页 |
| 参考文献 | 第89-94页 |
| 综述2 | 第94-108页 |
| 参考文献 | 第103-108页 |
| 致谢 | 第108页 |
