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小麦条锈菌PsDLC8和PsACT1的克隆与功能分析

摘要第1-6页
ABSTRACT第6-10页
第一章 绪论第10-19页
   ·小麦条锈菌第10-12页
     ·小麦条锈病的危害及分布第10页
     ·小麦条锈菌的生物学特征第10-11页
     ·小麦条锈菌的研究现状第11-12页
   ·顶端生长第12-15页
     ·顶端生长的过程第12-14页
     ·Spk 区第14-15页
   ·细胞骨架第15-17页
     ·肌动蛋白及微丝第15-16页
     ·微管与动力蛋白第16-17页
   ·本研究的目的意义、研究内容及技术路线第17-19页
     ·目的及意义第17页
     ·研究内容第17-19页
第二章 小麦条锈菌 PsDLC8 的克隆、表达及功能分析第19-36页
   ·材料、试剂及仪器第19-20页
     ·材料第19页
     ·试剂盒、工具酶、载体、菌株及其他试剂第19页
     ·仪器第19-20页
   ·试验方法第20-26页
     ·材料的培养和处理第20页
     ·小麦条锈菌 DLC8 基因 EST 序列的查找第20页
     ·感受态细胞的制备第20页
     ·总 RNA 的提取第20-21页
     ·RACE 克隆 PsDLC8 全长第21页
     ·PCR 产物的纯化第21-22页
     ·pMD 18-T-PsDLC8 的构建第22页
     ·质粒的提取及鉴定第22页
     ·小麦条锈菌 PsDLC8 序列分析第22页
     ·cDNA 第一链的合成第22页
     ·融合表达质粒 pET41a-PsDLC8 的构建第22-23页
     ·融合表达质粒 pET41a-PsDLC8 的诱导表达及 SDS-PAGE第23页
     ·融合蛋白亲和层析纯化及 western blot 分析第23-24页
     ·目的蛋白的酶切纯化及抗体制备第24页
     ·构巢曲霉△nudG 突变体互补实验第24-26页
     ·Real time PCR 分析第26页
   ·结果与分析第26-35页
     ·小麦条锈菌 PsDLC8 全长 cDNA第26-27页
     ·序列相似性及进化树分析第27-28页
     ·氨基酸序列分析第28-29页
     ·pET41a-PsDLC8 表达载体的构建第29-30页
     ·pET41a-PsDLC8 原核表达、融合蛋白的纯化及 western blot 分析第30-31页
     ·构巢曲霉突变体恢复试验第31-34页
     ·Real time PCR 分析第34-35页
   ·小结第35-36页
第三章 小麦条锈菌 PsACT1 的克隆及功能分析第36-46页
   ·材料、试剂及仪器第36页
     ·小麦条锈菌种及小麦品种第36页
     ·试剂盒、工具酶、载体、菌株及其他试剂第36页
     ·仪器第36页
   ·试验方法第36-38页
     ·培养和处理第36页
     ·小麦条锈菌 ACT1 基因的 EST 序列的查找第36页
     ·感受态的制备第36-37页
     ·总 RNA 的提取第37页
     ·RACE 克隆 PsACT1 全长第37页
     ·pMD 18-T-PsACT1 的构建第37页
     ·质粒的提取及鉴定第37页
     ·小麦条锈菌 PsACT1 序列分析第37页
     ·cDNA 第一链的合成第37页
     ·Real time PCR 分析第37页
     ·在芽管形成过程中 F-actin 的定位第37页
     ·细胞松弛素 B 对夏孢子萌发的影响第37-38页
     ·细胞松弛素 B 对囊泡转运的影响第38页
   ·结果与分析第38-45页
     ·小麦条锈菌 PsACT1 全长 cDNA第38-39页
     ·序列相似性及同源性分析第39-40页
     ·氨基酸序列分析第40-41页
     ·PsACT1 的多序列比对分析第41-42页
     ·Real time PCR 分析第42页
     ·在芽管形成过程中 F-actin 的定位第42-43页
     ·细胞松弛素 B 对芽管形成的影响第43-44页
     ·细胞松弛素 B 对囊泡转运的影响第44-45页
   ·小结第45-46页
第四章 结论与讨论第46-49页
   ·小麦条锈菌动力蛋白轻链基因 PsDLC8第46-47页
   ·小麦条锈菌肌动蛋白基因 PsACT1第47-48页
   ·研究展望第48-49页
参考文献第49-54页
致谢第54-55页
作者简介第55页

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