| 摘要 | 第6-8页 |
| Abstract | 第8-9页 |
| 第一章 前言 | 第12-22页 |
| 1.1 骨肉瘤相关基因研究进展 | 第12-16页 |
| 1.1.1 抑癌基因 | 第12-13页 |
| 1.1.2 原癌基因 | 第13-14页 |
| 1.1.3 新型研究热点-Runx2基因 | 第14-16页 |
| 1.2 KIAA2018基因 | 第16-18页 |
| 1.2.1 bHLH转录因子超家族成员——KIAA2018 | 第16页 |
| 1.2.2 KIAA2018的亲缘性蛋白——AP-1 | 第16-18页 |
| 1.3 miRNA | 第18-20页 |
| 1.3.1 miRNA的生成和作用机制 | 第18-19页 |
| 1.3.2 miRNA相关SNP | 第19页 |
| 1.3.3 miRNA与骨肉瘤 | 第19-20页 |
| 1.4 本研究的目的与意义 | 第20-22页 |
| 第二章 材料与方法 | 第22-37页 |
| 2.1 材料 | 第22-26页 |
| 2.1.1 主要材料 | 第22-24页 |
| 2.1.2 主要试剂 | 第24-25页 |
| 2.1.3 主要仪器 | 第25-26页 |
| 2.2 方法 | 第26-37页 |
| 2.2.1 细胞培养 | 第26页 |
| 2.2.2 感受态细胞DH5α的制备 | 第26页 |
| 2.2.3 生物信息学工具 | 第26-27页 |
| 2.2.4 野生型重组载体构建 | 第27-30页 |
| 2.2.5 突变型载体构建 | 第30-31页 |
| 2.2.6 KIAA2018敲降型Saos-2细胞模型的构建 | 第31-32页 |
| 2.2.7 细胞转染 | 第32-33页 |
| 2.2.8 RT-qPCR | 第33-35页 |
| 2.2.9 双荧光素酶报告基因系统检测 | 第35-36页 |
| 2.2.10 数据统计分析 | 第36-37页 |
| 第三章 结果 | 第37-50页 |
| 3.1 慢病毒介导shRNA沉默人KIAA2018对Runx2表达的影响 | 第37-42页 |
| 3.1.1 人KIAA2018慢病毒干扰载体的构建 | 第37-39页 |
| 3.1.2 人KIAA2018慢病毒干扰载体的包装 | 第39页 |
| 3.1.3 慢病毒滴度测定 | 第39-41页 |
| 3.1.4 KIAA2018基因敲降型Saos-2细胞模型的构建 | 第41页 |
| 3.1.5 KIAA2018基因敲降型Saos-2细胞模型的鉴定 | 第41-42页 |
| 3.1.6 KIAA2018基因敲降型Saos-2细胞中Runx2的转录水平 | 第42页 |
| 3.2 调控KIAA2018的miRNA的鉴定 | 第42-46页 |
| 3.2.1 生物信息学分析 | 第42-43页 |
| 3.2.2 双荧光素酶报告基因检测 | 第43-45页 |
| 3.2.3 过表达外源性miR-27a对KIAA2018转录水平的影响 | 第45-46页 |
| 3.2.4 抑制内源性miR-27A对KIAA2018转录水平的影响 | 第46页 |
| 3.3 KIAA2018 3'UTR区miRNA相关SNP的鉴定 | 第46-50页 |
| 3.3.1 生物信息学分析 | 第46-47页 |
| 3.3.2 荧光素酶报告基因法检验 | 第47-50页 |
| 第四章 讨论 | 第50-53页 |
| 4.1 KIAA2018基因敲降型Saos-2细胞模型的构建 | 第50页 |
| 4.2 人骨肉瘤细胞中KIAA2018沉默对Runx2转录的影响 | 第50-51页 |
| 4.3 miR-27a/KIAA2018/骨肉瘤 | 第51-52页 |
| 4.4 KIAA2018 3'UTR区miRNA相关SNP rs9814605和rs13065268 | 第52-53页 |
| 参考文献 | 第53-64页 |
| 硕士期间已发表学术成果 | 第64-65页 |
| 致谢 | 第65页 |
