| 摘要 | 第4-6页 |
| ABSTRACT | 第6-7页 |
| 第一章 前言 | 第11-21页 |
| 1.1 脂肪酶的概述 | 第11页 |
| 1.2 脂肪酶的来源与生产 | 第11-12页 |
| 1.3 脂肪酶的结构特点 | 第12-13页 |
| 1.4 脂肪酶反应类型 | 第13-14页 |
| 1.5 产脂肪酶菌株的筛选 | 第14页 |
| 1.6 脂肪酶的酶活测定方法 | 第14-15页 |
| 1.7 脂肪酶的应用 | 第15-18页 |
| 1.7.1 在洗涤业的应用 | 第15页 |
| 1.7.2 在纺织业的应用 | 第15-16页 |
| 1.7.3 在合成生物高分子聚合物方面的应用 | 第16页 |
| 1.7.4 在食品工业的应用 | 第16页 |
| 1.7.5 在制药行业的应用 | 第16-17页 |
| 1.7.6 在生物柴油的合成方面应用 | 第17页 |
| 1.7.8 在茶叶加工中的应用 | 第17页 |
| 1.7.9 在废物处理方面的应用 | 第17-18页 |
| 1.8 脂肪酶基因的克隆表达 | 第18-19页 |
| 1.9 研究背景与意义 | 第19-20页 |
| 1.10 技术路线 | 第20-21页 |
| 第二章 材料与方法 | 第21-33页 |
| 2.1 实验材料 | 第21-22页 |
| 2.1.1 菌株和质粒 | 第21页 |
| 2.1.2 主要酶和试剂 | 第21页 |
| 2.1.3 培养基及主要仪器设备 | 第21-22页 |
| 2.2 实验方法 | 第22-33页 |
| 2.2.1 产脂肪酶野生菌的筛选 | 第22页 |
| 2.2.2 基因组DNA的提取 | 第22页 |
| 2.2.3 菌株的16S rDNA鉴定及系统发育树分析 | 第22-23页 |
| 2.2.4 葡萄球菌和链霉菌脂肪酶基因的克隆 | 第23-25页 |
| 2.2.5 限制性内切酶酶切目的基因和载体 | 第25-26页 |
| 2.2.6 目的基因和表达载体的连接 | 第26-27页 |
| 2.2.7 连接产物的表达宿主菌感受态细胞的转化 | 第27页 |
| 2.2.8 重组质粒的筛选与酶切验证 | 第27页 |
| 2.2.9 重组表达质粒的诱导表达 | 第27页 |
| 2.2.10 脂肪酶的纯化 | 第27-28页 |
| 2.2.11 SDS-PAGE检测 | 第28-29页 |
| 2.2.12 蛋白浓度测定 | 第29-30页 |
| 2.2.13 脂肪酶酶学性质研究 | 第30页 |
| 2.2.14 酶活力测定 | 第30-33页 |
| 第三章 结果分析 | 第33-59页 |
| 3.1 菌株的筛选及16S rDNA的鉴定 | 第33-36页 |
| 3.1.1 菌株的筛选 | 第33页 |
| 3.1.2 菌株的16S rDNA鉴定及系统发育树分析 | 第33-36页 |
| 3.2 葡萄球菌STL-01脂肪酶基因的克隆表达 | 第36-40页 |
| 3.2.1 脂肪酶基因保守序列的扩增 | 第36-37页 |
| 3.2.2 脂肪酶基因lip1的PCR扩增与表达载体的构建 | 第37-38页 |
| 3.2.3 重组质粒pET22b(+)-lip1的验证 | 第38-39页 |
| 3.2.4 重组脂肪酶Lip1的SDS-PAGE电泳 | 第39-40页 |
| 3.3 重组脂肪酶Lip1的酶学性质研究 | 第40-47页 |
| 3.3.1 重组脂肪酶Lip1最适pH和pH稳定性的测定 | 第40-42页 |
| 3.3.2 重组脂肪酶Lip1最适温度和温度稳定性的测定 | 第42-43页 |
| 3.3.3 重组脂肪酶Lip1底物特异性的测定 | 第43页 |
| 3.3.4 表面活性剂对重组脂肪酶Lip1活性的影响 | 第43-44页 |
| 3.3.5 金属离子对重组脂肪酶Lip1活性的影响 | 第44-45页 |
| 3.3.6 重组脂肪酶Lip1的有机溶剂耐受性 | 第45-46页 |
| 3.3.7 重组脂肪酶Lip1的甲醇耐受性的测定 | 第46-47页 |
| 3.4 链霉菌GX-T6总DNA的提取 | 第47页 |
| 3.5 链霉菌GX-T6脂肪酶基因lip3克隆表达 | 第47-51页 |
| 3.5.1 脂肪酶基因lip3生物信息学分析 | 第48页 |
| 3.5.2 脂肪酶基因lip3的PCR扩增与表达载体的构建 | 第48-49页 |
| 3.5.3 重组质粒pSE380-lip3的验证 | 第49-51页 |
| 3.5.4 重组脂肪酶Lip3的SDS-PAGE电泳 | 第51页 |
| 3.6 重组脂肪酶Lip3的酶学性质研究 | 第51-59页 |
| 3.6.1 重组脂肪酶Lip3最适pH和pH稳定性的测定 | 第51-53页 |
| 3.6.2 重组脂肪酶Lip3最适温度和温度稳定性的测定 | 第53-54页 |
| 3.6.3 重组脂肪酶Lip3底物特异性的测定 | 第54-55页 |
| 3.6.4 表面活性剂对重组脂肪酶Lip3活性的影响 | 第55-56页 |
| 3.6.5 金属离子对重组脂肪酶Lip3活性的影响 | 第56页 |
| 3.6.6 重组脂肪酶Lip3的有机溶剂的耐受性 | 第56-57页 |
| 3.6.7 重组脂肪酶Lip3的甲醇耐受性的测定 | 第57-59页 |
| 第四章 讨论 | 第59-62页 |
| 4.1 温度对脂肪酶的影响 | 第59页 |
| 4.2 pH对脂肪酶活性的影响 | 第59-60页 |
| 4.3 金属离子对脂肪酶活性的影响 | 第60-61页 |
| 4.4 脂肪酶有机溶剂的耐受性 | 第61-62页 |
| 第五章 结论与展望 | 第62-64页 |
| 5.1 结论 | 第62页 |
| 5.2 问题与展望 | 第62-64页 |
| 参考文献 | 第64-72页 |
| 附录1 | 第72-75页 |
| 附录2 | 第75-78页 |
| 附录3 | 第78-81页 |
| 致谢 | 第81-82页 |
| 攻读硕士学位期间发表的学术论文 | 第82页 |
