| 摘要 | 第4-5页 |
| Abstract | 第5-6页 |
| 第一部分 文献综述 | 第9-19页 |
| 一、神经干细胞的诱导分化 | 第9-12页 |
| (一) 神经干细胞的分化机制 | 第9-11页 |
| (二) 胆碱能神经元细胞 | 第11页 |
| (三) 小鼠畸胎瘤细胞 | 第11-12页 |
| 二、KLF4及其与神经细胞分化的关系 | 第12-14页 |
| (一) KLF4的概述 | 第12-13页 |
| (二) KLF4与神经细胞分化 | 第13-14页 |
| 三、WNT/B-CATENIN信号通路 | 第14-16页 |
| (一) Wnt/β-catenin信号通路 | 第14-15页 |
| (二) Wnt/β-catenin信号通路与干细胞调控 | 第15-16页 |
| (三) Wnt/β-catenin信号通路与神经干细胞分化 | 第16页 |
| 四、基于基因表达调控元件的药物筛选 | 第16-18页 |
| (一) 真核基因表达调控元件 | 第16-17页 |
| (二) 药物筛选系统 | 第17-18页 |
| 五、本研究的目的与意义 | 第18-19页 |
| 第二部分 材料和方法 | 第19-29页 |
| 一、实验材料 | 第19-22页 |
| (一) 主要实验仪器 | 第19页 |
| (二) 实验试剂 | 第19-21页 |
| (三) 质粒与细胞 | 第21-22页 |
| 二、实验方法 | 第22-29页 |
| (一) KLF4的基因编码序列和启动子序列的钓取 | 第22-24页 |
| (二) KLF4基因真核表达载体和启动子荧光素酶报告载体的构建 | 第24-25页 |
| (三) KLF4启动子荧光素酶报告载体的活性检测 | 第25页 |
| (四) KLF4表达抑制剂的筛选 | 第25-26页 |
| (五) 细胞培养与细胞转染 | 第26-27页 |
| (六) MTT法检测细胞活力 | 第27页 |
| (七) 蛋白质的提取和蛋白质免疫印迹分析(Western Blot) | 第27-29页 |
| 第三部分 实验结果 | 第29-43页 |
| 一、KLF4基因真核表达载体和KLF4启动子荧光素酶重组载体的构建 | 第29-32页 |
| (一) KLF4基因真核表达载体的构建及鉴定 | 第29-30页 |
| (二) KLF4启动子荧光素酶报告载体的构建及鉴定 | 第30-32页 |
| 二、基于KLF4启动子活性的化合物筛选 | 第32-37页 |
| (一) KLF4蛋白表达抑制剂的初步筛选 | 第32-35页 |
| (二) KLF4蛋白表达抑制剂的复筛 | 第35-36页 |
| (三) 目标化合物对KLF4蛋白表达的影响 | 第36-37页 |
| 三、目标化合物对胆碱能神经元细胞标志分子CHAT表达的影响 | 第37-39页 |
| (一) KLF4在不同分化阶段的神经细胞中的表达 | 第37页 |
| (二) 目标化合物调控胆碱能神经元标志物ChAT表达 | 第37-38页 |
| (三) 目标化合物促进ChAT表达的浓度依赖性研究 | 第38-39页 |
| (四) 目标化合物促进ChAT表达的时间依赖性研究 | 第39页 |
| 四、WNT/B-CATENIN信号在目标化合物诱导CHAT表达中的作用 | 第39-43页 |
| (一) 过表达KLF4对Wnt/β-catenin信号的影响 | 第39-40页 |
| (二) 目标化合物对Wnt/β-catenin信号的影响 | 第40-41页 |
| (三) Wnt/β-catenin信号参与CA71诱导的神经分化 | 第41-43页 |
| 第四部分 讨论 | 第43-45页 |
| 第五部分 结论 | 第45-46页 |
| 参考文献 | 第46-53页 |
| 附录 | 第53-54页 |
| 致谢 | 第54-55页 |
| 作者简介 | 第55页 |
