| 符号说明 | 第4-10页 |
| 摘要 | 第10-12页 |
| 英文摘要 | 第12-13页 |
| 1 文献综述 | 第14-24页 |
| 1.1 羊传染性脓疱病概述 | 第14-15页 |
| 1.2 羊口疮病毒 | 第15-19页 |
| 1.2.1 病毒形态结构 | 第15-16页 |
| 1.2.2 病毒基因组结构 | 第16-17页 |
| 1.2.3 病毒功能性基因 | 第17-19页 |
| 1.3 羊口疮疫苗载体 | 第19-20页 |
| 1.4 CRISPR/Cas9基因编辑技术 | 第20-23页 |
| 1.4.1 CRISPR/Cas9原理 | 第21-22页 |
| 1.4.2 CRISPR/Cas9系统的优势及应用 | 第22-23页 |
| 1.5 研究目的和意义 | 第23-24页 |
| 2 材料与方法 | 第24-38页 |
| 2.1 材料 | 第24-26页 |
| 2.1.1 细胞、病毒、质粒、实验动物来源 | 第24页 |
| 2.1.2 主要试剂 | 第24页 |
| 2.1.3 主要器材 | 第24-26页 |
| 2.2 方法 | 第26-38页 |
| 2.2.1 2E4杂交瘤细胞培养 | 第26页 |
| 2.2.2 引物设计 | 第26页 |
| 2.2.3 杂交瘤细胞总RNA的提取 | 第26-27页 |
| 2.2.4 RT-PCR扩增V_L、V_H基因 | 第27页 |
| 2.2.5 PCR产物回收、连接、转化 | 第27-28页 |
| 2.2.6 克隆质粒的鉴定及测序 | 第28页 |
| 2.2.7 抗体可变区序列和同源建模分析 | 第28-29页 |
| 2.2.8 CDRs区氨基酸突变鉴定 | 第29-30页 |
| 2.2.9 B2L基因表达载体构建 | 第30-32页 |
| 2.2.10 B2L基因体外CRISPR切割实验 | 第32-33页 |
| 2.2.11 B2L基因在病毒中的编辑 | 第33-38页 |
| 3 结果与分析 | 第38-56页 |
| 3.1 ORFV单抗 2E4可变区氨基酸序列的同源建模分析 | 第38-44页 |
| 3.1.1 PCR扩增抗体V_L和V_H基因 | 第38页 |
| 3.1.2 克隆质粒的鉴定 | 第38-40页 |
| 3.1.3 2E4抗体V_L和V_H基因的序列分析结果 | 第40-42页 |
| 3.1.4 2E4单抗可变区同源建模及其空间结构特征 | 第42-43页 |
| 3.1.5 CDRs区氨基酸突变结果 | 第43-44页 |
| 3.2 采用CRISPR/Cas9技术编辑ORFV B2L基因 | 第44-56页 |
| 3.2.1 病毒DNA基因组提取结果 | 第44-45页 |
| 3.2.2 B2L基因PCR扩增结果 | 第45页 |
| 3.2.3 B2L-pET-32a重组质粒鉴定 | 第45-46页 |
| 3.2.4 B2L基因gRNA1、gRNA2打靶序列选取 | 第46页 |
| 3.2.5 体外转录gRNA靶序列扩增结果 | 第46-47页 |
| 3.2.6 Cas9核酸酶体外切割结果 | 第47-48页 |
| 3.2.7 gRNA1-pGEMT-easy重组质粒构建 | 第48-49页 |
| 3.2.8 编辑质粒转染结果 | 第49页 |
| 3.2.9 gRNA1检测引物PCR结果 | 第49-50页 |
| 3.2.10 打靶片段测序结果 | 第50-51页 |
| 3.2.11 间接免疫荧光检测B2L表达结果 | 第51-52页 |
| 3.2.12 病毒TCID50测定结果 | 第52-53页 |
| 3.2.13 电镜观察结果 | 第53-54页 |
| 3.2.14 动物接毒结果 | 第54-56页 |
| 4 讨论 | 第56-60页 |
| 4.1 ORFV单抗 2E4可变区氨基酸序列的同源建模分析 | 第56-57页 |
| 4.2 采用CRISPR/Cas9技术编辑ORFV B2L基因 | 第57-60页 |
| 5 结论 | 第60-61页 |
| 参考文献 | 第61-69页 |
| 致谢 | 第69-70页 |
| 附录 | 第70-72页 |
| 个人简历 | 第72页 |
