| 摘要 | 第8-10页 |
| Abstract | 第10-12页 |
| 缩略语表（Abbreviation） | 第13-15页 |
| 1 文献综述 | 第15-29页 |
| 1.1 精原干细胞的生物学活性及其表面表型研究进展 | 第15-19页 |
| 1.1.1 精原干细胞的生物学活性 | 第15-17页 |
| 1.1.2 精原干细胞的表面表型研究进展 | 第17-19页 |
| 1.2 精原干细胞的分离和纯化研究进展 | 第19-22页 |
| 1.2.1 精原干细胞的分离研究进展 | 第20-21页 |
| 1.2.2 精原干细胞的纯化研究进展 | 第21-22页 |
| 1.3 家畜精原干细胞的体外培养研究进展 | 第22-26页 |
| 1.3.1 培养基 | 第23-24页 |
| 1.3.2 生长因子 | 第24-25页 |
| 1.3.3 血清 | 第25页 |
| 1.3.4 饲养层 | 第25-26页 |
| 1.4 外源添加物对精原干细胞增殖的影响 | 第26-28页 |
| 1.4.1 枸杞多糖 | 第26-27页 |
| 1.4.2 维生素C | 第27-28页 |
| 1.4.3 细胞分裂素 | 第28页 |
| 1.5 研究目的和意义 | 第28-29页 |
| 2 材料与方法 | 第29-49页 |
| 2.1 材料 | 第29-31页 |
| 2.1.1 实验动物及细胞 | 第29页 |
| 2.1.2 主要仪器和材料 | 第29-30页 |
| 2.1.3 主要试剂 | 第30-31页 |
| 2.2 试验设计 | 第31-33页 |
| 2.2.1 不同年龄山羊特异性标记表达量的检测 | 第31页 |
| 2.2.2 丝裂霉素-C处理时间和胰蛋白酶对三种细胞制备饲养层的影响 | 第31-32页 |
| 2.2.3 分离和不同纯化阶段山羊SSCs纯度的流式分析检测 | 第32页 |
| 2.2.4 不同浓度血清对山羊SSCs体外培养的影响 | 第32页 |
| 2.2.5 不同浓度枸杞多糖对山羊SSCs体外培养的影响 | 第32-33页 |
| 2.2.6 不同浓度维生素C对山羊SSCs体外培养的影响 | 第33页 |
| 2.2.7 不同浓度细胞分裂素对山羊SSCs体外培养的影响 | 第33页 |
| 2.3 方法 | 第33-49页 |
| 2.3.1 试剂配制 | 第33-35页 |
| 2.3.2 样品的采集 | 第35页 |
| 2.3.3 免疫组化 | 第35-37页 |
| 2.3.4 Western blot检测 | 第37-39页 |
| 2.3.5 睾丸组织的RT-PCR、qRT-PCR检测 | 第39-41页 |
| 2.3.6 精原细胞的分离 | 第41-42页 |
| 2.3.7 山羊精原干细胞的纯化 | 第42-43页 |
| 2.3.8 流式细胞分析 | 第43-44页 |
| 2.3.9 饲养层准备 | 第44-47页 |
| 2.3.10 精原干细胞体外培养 | 第47页 |
| 2.3.11 精原细胞克隆的增殖分析 | 第47-48页 |
| 2.3.12 免疫细胞化学 | 第48页 |
| 2.3.13 统计分析 | 第48-49页 |
| 3 结果与分析 | 第49-70页 |
| 3.1 山羊睾丸组织中CDH1、UCHL1 定位表达 | 第49-50页 |
| 3.2 山羊睾丸组织分子标记mRNA水平的表达水平 | 第50-51页 |
| 3.3 山羊睾丸组织分子标记蛋白表达水平 | 第51页 |
| 3.4 山羊SSCS的分离和纯化效率 | 第51-52页 |
| 3.5 丝裂霉素-C处理时间和胰蛋白酶对饲养层制备效果的影响 | 第52-58页 |
| 3.5.1 无胰蛋白酶处理 | 第52-55页 |
| 3.5.2 胰蛋白酶处理 | 第55-58页 |
| 3.6 体外培养的细胞及其饲养层细胞 | 第58-61页 |
| 3.6.1 体外培养的MEF及其饲养层 | 第58-59页 |
| 3.6.2 体外培养的STO及其饲养层 | 第59-60页 |
| 3.6.3 体外培养Hela及其饲养层 | 第60-61页 |
| 3.7 血清饲养层培养体系中山羊SSCS增殖和克隆数 | 第61-64页 |
| 3.8 添加枸杞多糖时山羊SSCS增殖和克隆数 | 第64-66页 |
| 3.9 添加维生素C时山羊SSCS增殖和克隆数 | 第66-67页 |
| 3.10 添加细胞分裂素时山羊SSCS增殖和克隆数 | 第67-69页 |
| 3.11 体外培养SSCS克隆中特异性分子标志表达 | 第69-70页 |
| 4 讨论 | 第70-75页 |
| 4.1 山羊睾丸取材年龄的选择 | 第70页 |
| 4.2 山羊SSCS纯化效果 | 第70-71页 |
| 4.3 丝裂霉素C处理制备饲养层的优化 | 第71-72页 |
| 4.4 血清体外培养体系的优化 | 第72-73页 |
| 4.5 枸杞多糖对山羊SSCS体外增殖的影响 | 第73页 |
| 4.6 维生素C对山羊SSCS体外增殖的影响 | 第73-74页 |
| 4.7 细胞分裂素对山羊SSCS体外增殖的影响 | 第74-75页 |
| 5 小结 | 第75-76页 |
| 5.1 本研究的主要结论 | 第75页 |
| 5.2 本研究的创新点 | 第75页 |
| 5.3 本研究的不足和下一步研究计划 | 第75-76页 |
| 参考文献 | 第76-91页 |
| 附录 | 第91-92页 |
| 致谢 | 第92页 |
