| 摘要 | 第1-7页 |
| Abstract | 第7-12页 |
| 英文缩略词表 | 第12-14页 |
| 第一章 绪论 | 第14-25页 |
| ·单纯疱疹病毒Ⅱ型概述 | 第14页 |
| ·HSV的形态与结构 | 第14-15页 |
| ·HSV-2的基因与表达 | 第15页 |
| ·HSV-2的感染与治疗 | 第15-16页 |
| ·HSV ICP27概述 | 第16-22页 |
| ·ICP27与HSV mRNA出核运输 | 第17-18页 |
| ·ICP27与HSV的免疫逃避 | 第18-19页 |
| ·ICP27调节病毒基因表达 | 第19-20页 |
| ·ICP27与细胞凋亡 | 第20-22页 |
| ·本课题的研究意义及主要内容 | 第22-25页 |
| ·本课题的研究意义 | 第22-23页 |
| ·本课题的研究内容 | 第23-25页 |
| 第二章 单纯疱疹病毒Ⅱ型多功能蛋白ICP27真核表达载体的构建 | 第25-47页 |
| ·前言 | 第25页 |
| ·实验材料 | 第25-28页 |
| ·主要仪器和设备 | 第25-26页 |
| ·菌株和质粒 | 第26页 |
| ·主要试剂 | 第26-27页 |
| ·溶液和培养基 | 第27-28页 |
| ·技术路线 | 第28-29页 |
| ·实验方法 | 第29-39页 |
| ·Vero细胞的培养 | 第29-30页 |
| ·HSV-2的培养 | 第30页 |
| ·HSV-2基因组的提取 | 第30-31页 |
| ·HSV-2 ICP27序列的PCR扩增 | 第31-33页 |
| ·琼脂糖凝胶电泳鉴定PCR产物 | 第33页 |
| ·凝胶回收纯化PCR产物 | 第33-34页 |
| ·pEGFPC2真核表达质粒的扩增 | 第34-36页 |
| ·pEGFPC2多克隆位点BamH Ⅰ、EcoR Ⅰ的鉴定 | 第36-37页 |
| ·pEGFPC2质粒和PCR产物的双酶切 | 第37页 |
| ·目的基因与质粒载体的连接 | 第37-38页 |
| ·制备感受细胞及连接产物的转化 | 第38页 |
| ·菌落PCR鉴定阳性克隆菌落 | 第38页 |
| ·重组质粒的鉴定 | 第38-39页 |
| ·结果与讨论 | 第39-45页 |
| ·HSV-2对Vero细胞的病变作用 | 第39-40页 |
| ·HSV-2基因组电泳检测 | 第40页 |
| ·ICP27序列的PCR扩增 | 第40页 |
| ·质粒pEGFPC2多克隆位点BamH Ⅰ、EcoR Ⅰ的鉴定 | 第40-41页 |
| ·菌落PCR鉴定阳性克隆 | 第41页 |
| ·重组质粒EcoR Ⅰ、BamH Ⅰ又酶切鉴定 | 第41-42页 |
| ·重组质粒pEGFP-ICP27测序鉴定 | 第42-45页 |
| ·讨论 | 第45-46页 |
| ·小结 | 第46-47页 |
| 第三章 单纯疱疹病毒Ⅱ型ICP27在Vero细胞中的表达及鉴定 | 第47-64页 |
| ·前言 | 第47页 |
| ·实验材料 | 第47-50页 |
| ·主要仪器和设备 | 第47-48页 |
| ·细胞、菌株和质粒 | 第48页 |
| ·主要试剂 | 第48-49页 |
| ·溶液 | 第49-50页 |
| ·技术路线 | 第50页 |
| ·实验方法 | 第50-59页 |
| ·提取无内毒素质粒 | 第51-52页 |
| ·质粒浓度的测定 | 第52页 |
| ·质粒瞬时转染Vero细胞 | 第52-53页 |
| ·RT-PCR鉴定ICP27的转录 | 第53-55页 |
| ·Western blot鉴定ICP27的表达 | 第55-58页 |
| ·pEGFP-ICP27表达过程的研究 | 第58-59页 |
| ·融合蛋白在Vero细胞中的定位 | 第59页 |
| ·结果与讨论 | 第59-62页 |
| ·质粒在Vero细胞中的表达 | 第59-60页 |
| ·RT-PCR鉴定ICP27在Vero细胞中的转录 | 第60页 |
| ·Westen blot鉴定ICP27的表达 | 第60页 |
| ·BCA测定蛋白含量 | 第60-61页 |
| ·pEGFP-ICP27在Vero细胞中的表达过程 | 第61-62页 |
| ·ICP27在Vero细胞中的定位 | 第62页 |
| ·讨论 | 第62-63页 |
| ·小结 | 第63-64页 |
| 第四章 单纯疱疹病毒Ⅱ型ICP27对Vero细胞的凋亡作用 | 第64-76页 |
| ·前言 | 第64页 |
| ·实验材料 | 第64-66页 |
| ·主要仪器和设备 | 第64-65页 |
| ·质粒和细胞 | 第65页 |
| ·主要试剂 | 第65页 |
| ·溶液 | 第65-66页 |
| ·技术路线 | 第66页 |
| ·实验方法 | 第66-70页 |
| ·MTT法检测Vero细胞活性 | 第66-67页 |
| ·Giemsa染色检测凋亡细胞 | 第67页 |
| ·检测Caspase-3活性 | 第67-68页 |
| ·Bradford法测定蛋白含量 | 第68-69页 |
| ·实时荧光定量PCR检测Bax/Bcl-2 | 第69-70页 |
| ·统计学分析 | 第70页 |
| ·结果与讨论 | 第70-74页 |
| ·ICP27对Vero细胞活性的影响 | 第70-71页 |
| ·Giemsa染色检测凋亡细胞 | 第71页 |
| ·Caspase-3活性检测 | 第71-72页 |
| ·细胞总RNA的质量及纯度检测 | 第72页 |
| ·标准曲线的建立 | 第72-73页 |
| ·Bax、Bcl-2 mRNA相对定量分析 | 第73-74页 |
| ·讨论 | 第74页 |
| ·小结 | 第74-76页 |
| 结论与展望 | 第76-77页 |
| 参考文献 | 第77-81页 |
| 攻读硕士学位期间取得的研究成果 | 第81-82页 |
| 致谢 | 第82-83页 |
| 附件 | 第83页 |
