| 摘要 | 第6-9页 |
| Abstract | 第9-11页 |
| 前言 | 第16-18页 |
| 第一章 文献综述 | 第18-32页 |
| 1.1 脂肪组织种类及分布 | 第18页 |
| 1.2 脂肪组织功能 | 第18-20页 |
| 1.2.1 脂肪组织的能量代谢调控功能 | 第18-19页 |
| 1.2.2 脂肪组织的分泌功能 | 第19-20页 |
| 1.3 脂肪组织发育规律及相关基因研究进展 | 第20-23页 |
| 1.3.1 脂肪组织的发生和脂肪细胞的分化 | 第20页 |
| 1.3.2 脂肪细胞分化重要的分子机制 | 第20-21页 |
| 1.3.3 脂肪代谢相关基因研究进展 | 第21-23页 |
| 1.4 基因可变剪接的定义和类型 | 第23-24页 |
| 1.4.1 基因可变剪接的定义 | 第23页 |
| 1.4.2 基因可变剪接的类型 | 第23-24页 |
| 1.5 基因可变剪接的形成和调控机制 | 第24-26页 |
| 1.5.1 剪接体对pre-mRNA的加工过程 | 第24-25页 |
| 1.5.2 基因可变剪接的发生 | 第25页 |
| 1.5.3 基因可变剪接的调控机制 | 第25-26页 |
| 1.6 基因可变剪接的影响及研究现状 | 第26-28页 |
| 1.7 影响肉牛脂肪组织发育的因素 | 第28-29页 |
| 1.7.1 年龄对脂肪组织发育的影响 | 第28页 |
| 1.7.2 性激素对脂肪组织发育的影响 | 第28-29页 |
| 1.8 牛脂肪组织转录组研究进展 | 第29-30页 |
| 1.9 与牛脂肪沉积相关基因的可变剪接研究进展 | 第30-32页 |
| 第二章 牛皮下脂肪组织转录组测序及基因表达分析 | 第32-48页 |
| 2.1 材料方法 | 第32-35页 |
| 2.1.1 实验动物及组织样品采集 | 第32页 |
| 2.1.2 总RNA的提取 | 第32页 |
| 2.1.3 转录组文库构建 | 第32-33页 |
| 2.1.4 测序数据初步处理和分析 | 第33-35页 |
| 2.2 结果与分析 | 第35-45页 |
| 2.2.1 总RNA提取和质量检测 | 第35-36页 |
| 2.2.2 测序数据质量评估 | 第36-38页 |
| 2.2.3 测序数据和参考基因组比对注释 | 第38-39页 |
| 2.2.4 牛皮下脂肪组织基因表达概况 | 第39页 |
| 2.2.5 牛皮下脂肪组织共同高表达基因功能分析 | 第39-41页 |
| 2.2.6 不同牛皮下脂肪组织基因表达差异分析 | 第41-44页 |
| 2.2.7 牛皮下脂肪组织新转录本的预测 | 第44-45页 |
| 2.3 讨论 | 第45-47页 |
| 2.4 小结 | 第47-48页 |
| 第三章 年龄和性别对牛皮下脂肪组织基因表达差异的影响 | 第48-65页 |
| 3.1 材料方法 | 第48-51页 |
| 3.1.1 验证基因的选择及引物设计 | 第48-49页 |
| 3.1.2 反转录RNA成cDNA | 第49页 |
| 3.1.3 实时定量PCR及结果处理 | 第49-50页 |
| 3.1.4 差异基因功能富集分析 | 第50页 |
| 3.1.5 差异基因参与的信号通路富集分析 | 第50-51页 |
| 3.2 结果与分析 | 第51-62页 |
| 3.2.1 转录组测序基因表达结果验证 | 第51-52页 |
| 3.2.2 脂肪细胞分化标志基因表达分析 | 第52页 |
| 3.2.3 成年牛和胎牛皮下脂肪组织差异基因功能富集分析 | 第52-56页 |
| 3.2.4 成年牛和胎牛皮下脂肪组织差异基因参与的信号通路富集分析 | 第56-57页 |
| 3.2.5 性激素受体在不同脂肪组织内的表达情况 | 第57-58页 |
| 3.2.6 不同性别成年牛皮下脂肪组织之间差异基因功能富集分析 | 第58-61页 |
| 3.2.7 不同性别成年牛皮下脂肪组织之间差异基因参与的信号通路富集分析 | 第61-62页 |
| 3.3 讨论 | 第62-64页 |
| 3.4 小结 | 第64-65页 |
| 第四章 脂肪沉积相关基因的筛选 | 第65-80页 |
| 4.1 材料方法 | 第65-68页 |
| 4.1.1 组织样品采集 | 第65页 |
| 4.1.2 牛原代脂肪细胞培养 | 第65-66页 |
| 4.1.3 牛PPARG两种转录本（PPARG1和PPARG2）的克隆验证 | 第66-67页 |
| 4.1.4 罗格列酮处理牛原代脂肪细胞 | 第67页 |
| 4.1.5 利用腺病毒在牛原代脂肪细胞中超表达PPARG2 | 第67页 |
| 4.1.6 总RNA提取、cDNA合成及实时定量PCR | 第67页 |
| 4.1.7 数据处理 | 第67-68页 |
| 4.2 实验结果与分析 | 第68-77页 |
| 4.2.1 牛原代脂肪细胞培养 | 第68页 |
| 4.2.2 与脂肪沉积相关候选基因的初步选择 | 第68-70页 |
| 4.2.3 通过构建候选基因组织表达谱筛选在脂肪组织内高表达的基因 | 第70-73页 |
| 4.2.4 验证牛PPARG存在两种转录本 | 第73-74页 |
| 4.2.5 通过罗格列酮诱导脂肪沉积来筛选与脂肪沉积相关的基因 | 第74-76页 |
| 4.2.6 筛选受牛PPARG2调控且与脂肪沉积相关的基因 | 第76-77页 |
| 4.3 讨论 | 第77-79页 |
| 4.4 小结 | 第79-80页 |
| 第五章 脂肪组织内表达基因可变剪接特征分析 | 第80-93页 |
| 5.1 材料方法 | 第80-83页 |
| 5.1.1 基因可变剪接的预测 | 第80页 |
| 5.1.2 剪接位点附近序列富集分析 | 第80页 |
| 5.1.3 各皮下脂肪组织基因可变剪接统计 | 第80页 |
| 5.1.4 组织样品采集 | 第80-81页 |
| 5.1.5 实验样品RNA提取、cDNA合成及实时定量PCR | 第81页 |
| 5.1.6 牛NFIX基因不同转录本的预测 | 第81-82页 |
| 5.1.7 牛NFIX基因不同转录本的验证 | 第82-83页 |
| 5.2 实验结果与分析 | 第83-91页 |
| 5.2.1 牛皮下脂肪组织基因可变剪接预测及分类 | 第83页 |
| 5.2.2 牛皮下脂肪组织基因可变剪接位点及剪接体识别序列分析 | 第83-84页 |
| 5.2.3 牛皮下脂肪组织基因可变剪接组织特异性分析 | 第84-85页 |
| 5.2.4 牛NFIX基因可变剪接的预测 | 第85-88页 |
| 5.2.5 牛NFIX基因不同转录本的验证 | 第88-90页 |
| 5.2.6 牛NFIX基因不同转录本的组织表达谱分析 | 第90-91页 |
| 5.3 讨论 | 第91-92页 |
| 5.4 小结 | 第92-93页 |
| 第六章 脂肪沉积相关基因可变剪接模式及定位分析 | 第93-108页 |
| 6.1 材料方法 | 第93-98页 |
| 6.1.1 组织样品采集 | 第93页 |
| 6.1.2 总RNA提取和cDNA合成 | 第93页 |
| 6.1.3 牛TUSC5基因可变剪接验证 | 第93-94页 |
| 6.1.4 CEBPA不同转录本克隆及细胞定位载体构建 | 第94-95页 |
| 6.1.5 CIDEC不同转录本克隆及细胞定位载体构建 | 第95页 |
| 6.1.6 TUSC5不同转录本克隆及细胞定位载体构建 | 第95-98页 |
| 6.1.7 细胞定位分析 | 第98页 |
| 6.2 实验结果与分析 | 第98-106页 |
| 6.2.1 验证牛TUSC5基因存在可变剪接现象 | 第98-99页 |
| 6.2.2 牛脂肪沉积相关基因CEBPA可变剪接模式分析及不同转录本克隆 | 第99-101页 |
| 6.2.3 牛脂肪沉积相关基因CIDEC可变剪接模式分析及不同转录本克隆 | 第101-102页 |
| 6.2.4 牛脂肪沉积相关基因TUSC5可变剪接模式分析及不同转录本克隆 | 第102-104页 |
| 6.2.5 牛脂肪沉积相关基因CEBPA不同蛋白亚型细胞定位分析 | 第104-105页 |
| 6.2.6 牛脂肪沉积相关基因CIDEC不同蛋白亚型细胞定位分析 | 第105页 |
| 6.2.7 牛脂肪沉积相关基因TUSC5不同蛋白亚型细胞定位分析 | 第105-106页 |
| 6.2.8 牛TUSC5a和TUSC5b序列差异分析 | 第106页 |
| 6.3 讨论 | 第106-107页 |
| 6.4 小结 | 第107-108页 |
| 第七章 可变剪接对脂肪沉积相关基因TUSC5的作用影响 | 第108-118页 |
| 7.1 材料方法 | 第108-110页 |
| 7.1.1 组织样品采集 | 第108页 |
| 7.1.2 总RNA提取、cDNA合成及实时定量PCR | 第108页 |
| 7.1.3 TUSC5a和TUSC5b在 293T细胞内时序表达分析 | 第108页 |
| 7.1.4 利用免疫荧光进行亚细胞定位分析 | 第108-109页 |
| 7.1.5 细胞共定位分析 | 第109-110页 |
| 7.2 实验结果分析 | 第110-115页 |
| 7.2.1 TUSC5a和TUSC5b的组织表达谱比较分析 | 第110页 |
| 7.2.2 TUSC5a和TUSC5b在牛脂肪细胞不同分化时期的表达趋势分析 | 第110-111页 |
| 7.2.3 TUSC5a和TUSC5b在 293T细胞内时序表达分析 | 第111-113页 |
| 7.2.4 TUSC5a和TUSC5b的亚细胞定位分析 | 第113-114页 |
| 7.2.5 CIDEC2的亚细胞定位分析 | 第114-115页 |
| 7.2.6 TUSC5不同亚型和CIDEC2的细胞共定位分析 | 第115页 |
| 7.3 讨论 | 第115-117页 |
| 7.4 小结 | 第117-118页 |
| 结论与创新点 | 第118-119页 |
| 参考文献 | 第119-131页 |
| 附录 | 第131-151页 |
| 致谢 | 第151-152页 |
| 作者简介 | 第152-153页 |
