| 缩略词表 | 第9-10页 |
| 中文摘要 | 第10-12页 |
| Abstract | 第12-13页 |
| 引言 | 第14-16页 |
| 第一章 外源漆酶催化酚酸B生成反应的研究 | 第16-22页 |
| 1 实验试剂和仪器 | 第16-17页 |
| 1.1 实验试剂 | 第16-17页 |
| 1.2 仪器设备 | 第17页 |
| 2 实验方法 | 第17-19页 |
| 2.1 含量测定的相关设置 | 第17-18页 |
| 2.2 供试品溶液的制备 | 第18-19页 |
| 2.3 实验步骤 | 第19页 |
| 3 实验结果 | 第19-20页 |
| 4 小结和讨论 | 第20-22页 |
| 第二章 丹参漆酶家族的生物信息学分析 | 第22-29页 |
| 1 生物信息学分析工具 | 第22页 |
| 2 分析方法 | 第22-23页 |
| 3 实验结果 | 第23-27页 |
| 3.1 丹参漆酶蛋白(SmLACs)与其它植物漆酶之间的相似度分析 | 第23-24页 |
| 3.2 SmLACs的特征分析和结构预测 | 第24-25页 |
| 3.3 SmLACs蛋白的特征分析和结构预测 | 第25页 |
| 3.4 SmLACs蛋白相似性分析 | 第25页 |
| 3.5 SmLACs蛋白的系统进化分析和保守基序鉴定 | 第25-27页 |
| 4 小结和讨论 | 第27-29页 |
| 第三章 丹参漆酶的表达模式研究及功能基因筛选 | 第29-39页 |
| 1 不同漆酶基因的组织特异性研究 | 第29-31页 |
| 1.1 实验材料及设备 | 第29-30页 |
| 1.2 实验方法 | 第30-31页 |
| 2 不同漆酶基因的MeJA诱导后表达模式研究 | 第31-34页 |
| 2.1 MeJA诱导丹参发根 | 第31-32页 |
| 2.2 qRT-PCR检测Smlacs表达量 | 第32-34页 |
| 3 实验结果 | 第34-37页 |
| 3.1 RNA提取 | 第34页 |
| 3.2 29条Smlacs在不同组织器官中的转录水平分析 | 第34-35页 |
| 3.3 5条Smlacs在根、茎、叶表达量分析 | 第35-36页 |
| 3.4 5条Smlacs在发根中被MeJA诱导后表达量分析 | 第36-37页 |
| 4 小结和讨论 | 第37-39页 |
| 第四章 Smlac7、 Smlac20和Smlac28基因的克隆与真核表达 | 第39-54页 |
| 1 Smlac7、Smlac20和Smlac28 ORF的克隆 | 第39-44页 |
| 1.1实验材料及设备 | 第39-41页 |
| 1.2 实验方法 | 第41-44页 |
| 2 SmLAC7、SmLAC20和SmLAC28的真核表达 | 第44-48页 |
| 2.1 相关试剂配制 | 第44页 |
| 2.2 实验方法 | 第44-48页 |
| 3 SmLAC7、SmLAC20和SmLAC28蛋白的培养和纯化 | 第48-49页 |
| 3.1 目的蛋白的扩大培养 | 第48页 |
| 3.2 目的蛋白的纯化 | 第48页 |
| 3.3 浓缩蛋白和测定蛋白浓度 | 第48-49页 |
| 4 实验结果 | 第49-52页 |
| 4.1 Smlac7、Smlac20和Smlac28基因的克隆 | 第49-50页 |
| 4.2 Smlac7、Smlac20和Smlac28以及pPIC9K空载体的双酶切 | 第50-51页 |
| 4.3 Smlacs-pPIC9K载体构建菌检 | 第51-52页 |
| 4.4 含有重组质粒的GS115宿主细胞的筛选 | 第52页 |
| 5 小结和讨论 | 第52-54页 |
| 第五章 Smlac7、Smlac20和Smlac28的体内功能分析 | 第54-68页 |
| 1 实验材料 | 第54-55页 |
| 1.1 植物材料 | 第54页 |
| 1.2 菌株和质粒 | 第54页 |
| 1.3 试剂和药品 | 第54页 |
| 1.4 主要仪器设备 | 第54-55页 |
| 1.5 培养基与抗生素的配制 | 第55页 |
| 1.6 农杆菌C58C1感受态细胞的制备 | 第55页 |
| 2 实验方法 | 第55-60页 |
| 2.1 RNAi表达载体的构建 | 第55-57页 |
| 2.2 丹参发根的遗传转化和培养 | 第57-58页 |
| 2.3 DNA提取和PCR鉴定 | 第58-59页 |
| 2.4 发根的液培 | 第59页 |
| 2.5 发根中代谢途径基因表达水平检测 | 第59页 |
| 2.6 发根横切面显微切片 | 第59页 |
| 2.7 标准品溶液和供试品溶液的制备 | 第59-60页 |
| 2.8 目的漆酶的含量测定 | 第60页 |
| 3 实验结果 | 第60-65页 |
| 3.1 RNAi表达载体的构建 | 第60-61页 |
| 3.2 丹参发根的除菌培养 | 第61-62页 |
| 3.3 转基因发根的PCR检测 | 第62-63页 |
| 3.4 发根表型和显微结构分析 | 第63-64页 |
| 3.5 转基因发根目的基因表达量和化合物含量分析 | 第64-65页 |
| 4 小结和讨论 | 第65-68页 |
| 第六章 Smlac7和Smlac20代谢工程研究 | 第68-76页 |
| 1 实验材料 | 第68页 |
| 1.1 植物材料 | 第68页 |
| 1.2 菌株与质粒 | 第68页 |
| 1.3 试剂与药品 | 第68页 |
| 1.4 主要仪器设备 | 第68页 |
| 2 实验方法 | 第68-71页 |
| 2.1 丹参发根RNA的提取及检测 | 第68页 |
| 2.2 引物设计及目的片段的克隆 | 第68-70页 |
| 2.3 酶切与转化 | 第70页 |
| 2.4 丹参发根的培养 | 第70页 |
| 2.5 丹参发根的阳性筛选 | 第70-71页 |
| 2.6 目的基因的表达水平检测 | 第71页 |
| 2.7 转基因发根的含量测定 | 第71页 |
| 3 实验结果 | 第71-74页 |
| 3.1 Smlacs过表达载体的构建 | 第71页 |
| 3.2 PCR检测转基因发根 | 第71-72页 |
| 3.3 发根表型和显微结构研究 | 第72-73页 |
| 3.4 转基因发根目的基因表达量和化合物含量分析 | 第73-74页 |
| 4 小结与讨论 | 第74-76页 |
| 第七章 研究总结 | 第76-79页 |
| 参考文献 | 第79-81页 |
| 附录A 29条SmLACs生物信息学相关数据 | 第81-86页 |
| 附录B qRT-PCR分析目的基因表达水平原始数据 | 第86-90页 |
| 附录C 载体图谱 | 第90-93页 |
| 文献综述 | 第93-100页 |
| 参考文献 | 第99-100页 |
| 致谢 | 第100-101页 |
| 个人简历 | 第101页 |
