| 中文摘要 | 第1-5页 |
| 英文摘要 | 第5-11页 |
| 缩略词表 | 第11-12页 |
| 1 绪论 | 第12-26页 |
| ·抗菌肽的研究进展 | 第12-23页 |
| ·研究历史背景 | 第12页 |
| ·来源及分类 | 第12-14页 |
| ·分子结构 | 第14-16页 |
| ·生物活性 | 第16-17页 |
| ·作用机制 | 第17-19页 |
| ·作用特点 | 第19-20页 |
| ·基因工程研究 | 第20-22页 |
| ·应用价值 | 第22-23页 |
| ·课题的提出及意义 | 第23-24页 |
| ·本文的研究目的与内容 | 第24-26页 |
| ·研究目的 | 第24页 |
| ·研究内容 | 第24-26页 |
| 2 HMCM 的基因序列设计以及生物信息学分析 | 第26-30页 |
| ·引言 | 第26页 |
| ·HMCM 的基因序列设计 | 第26-27页 |
| ·HMCM 的一级氨基酸序列 | 第26页 |
| ·HMCM 的基因序列设计 | 第26-27页 |
| ·HMCM 的生物信息学分析 | 第27-29页 |
| ·一级结构分析 | 第27-28页 |
| ·二级结构分析 | 第28-29页 |
| ·小结 | 第29-30页 |
| 3 HMCM 原核表达载体的构建 | 第30-46页 |
| ·实验研究材料与设备 | 第30-32页 |
| ·研究材料 | 第30-31页 |
| ·实验设备 | 第31-32页 |
| ·HMCM 基因的克隆 | 第32-35页 |
| ·引物设计 | 第32-33页 |
| ·PCR 扩增目的基因 | 第33-35页 |
| ·表达载体的构建 | 第35-40页 |
| ·构建思路 | 第35页 |
| ·pET-32a-c(+)质粒的提取 | 第35-36页 |
| ·HMCM 基因片段和pET-32a-c(+)质粒的纯化 | 第36-37页 |
| ·HMCM 基因片段和pET-32a-c(+)质粒的双酶切 | 第37-38页 |
| ·重组质粒转化E.coli DH5α | 第38-39页 |
| ·重组质粒阳性克隆子的鉴定 | 第39-40页 |
| ·阳性克隆子的测序 | 第40页 |
| ·结果 | 第40-45页 |
| ·HMCM 基因的克隆 | 第40-41页 |
| ·pET-32a-c(+)质粒的提取 | 第41页 |
| ·HMCM 基因片段和pET-32a-c(+)质粒的双酶切 | 第41-42页 |
| ·双酶切产物的纯化 | 第42页 |
| ·阳性克隆子的菌落PCR 鉴定 | 第42-43页 |
| ·pET-32a-HMCM 质粒的提取和鉴定 | 第43-45页 |
| ·HMCM 基因的测序 | 第45页 |
| ·小结 | 第45-46页 |
| 4 融合蛋白的表达以及表达条件的优化 | 第46-60页 |
| ·实验研究材料与设备 | 第46-47页 |
| ·研究材料 | 第46-47页 |
| ·实验设备 | 第47页 |
| ·pET-32a-HMCM 质粒转化表达菌株 | 第47-48页 |
| ·pET-32a-HMCM 质粒转化E.coli BL21(DE3) | 第47-48页 |
| ·阳性克隆子菌落PCR 筛选 | 第48页 |
| ·融合蛋白的试表达 | 第48-50页 |
| ·融合蛋白的小瓶表达 | 第48-49页 |
| ·SDS-PAGE 检测目的融合蛋白 | 第49页 |
| ·融合蛋白的可溶性检测 | 第49-50页 |
| ·表达条件的优化 | 第50-51页 |
| ·诱导时间的优化 | 第50页 |
| ·诱导IPTG 浓度的优化 | 第50-51页 |
| ·诱导初始OD600 值的优化 | 第51页 |
| ·诱导温度的优化 | 第51页 |
| ·融合蛋白的大量表达 | 第51-52页 |
| ·融合蛋白的大瓶表达 | 第51-52页 |
| ·菌体的超声波破碎 | 第52页 |
| ·可溶蛋白的超滤 | 第52页 |
| ·结果 | 第52-59页 |
| ·表达菌株中pET-32a-HMCM 阳性克隆子筛选 | 第52-53页 |
| ·融合蛋白的试表达 | 第53页 |
| ·融合蛋白的可溶性检测 | 第53-55页 |
| ·最佳表达条件的确定 | 第55-59页 |
| ·小结 | 第59-60页 |
| 5 融合蛋白的分离纯化以及 HMCM 抗菌活性的初步鉴定 | 第60-72页 |
| ·实验研究材料与设备 | 第60-61页 |
| ·研究材料 | 第60-61页 |
| ·实验设备 | 第61页 |
| ·融合蛋白的纯化和Western-blotting 鉴定 | 第61-63页 |
| ·融合蛋白的亲和层析纯化 | 第61-62页 |
| ·纯化蛋白的SDS-PAGE 电泳 | 第62页 |
| ·纯化蛋白的Western-blotting 鉴定 | 第62-63页 |
| ·BCA 法测定蛋白浓度 | 第63页 |
| ·目的蛋白的酶切 | 第63-64页 |
| ·目的蛋白HMCM 抗菌活性的初步鉴定 | 第64页 |
| ·琼脂扩散法(抑菌圈)检测 HMCM 抗菌活性 | 第64页 |
| ·液体比浊法检测HMCM 抗菌活性 | 第64页 |
| ·结果 | 第64-70页 |
| ·目的融合蛋白的纯化和Western-blotting 检测 | 第64-67页 |
| ·蛋白浓度的测定 | 第67页 |
| ·目的蛋白的酶切 | 第67-68页 |
| ·琼脂扩散法检测结果 | 第68-69页 |
| ·液体比浊法检测结果 | 第69-70页 |
| ·小结 | 第70-72页 |
| 6 结论与展望 | 第72-76页 |
| ·结论 | 第72-73页 |
| ·主要结果 | 第72页 |
| ·讨论 | 第72-73页 |
| ·本研究创新点 | 第73页 |
| ·后续工作展望 | 第73-76页 |
| 致谢 | 第76-78页 |
| 参考文献 | 第78-84页 |
| 附录 | 第84页 |
| A.作者在攻读硕士学位期间发表的论文目录 | 第84页 |
| B.作者在攻读硕士学位期间专利情况 | 第84页 |
