| 摘要 | 第3-5页 |
| Abstract | 第5-6页 |
| 第一部分 引言 | 第11-22页 |
| 1.1 蔗糖的合成和代谢 | 第11-12页 |
| 1.2 蔗糖的运输方式机制的研究 | 第12-14页 |
| 1.3 蔗糖转运蛋白研究进展 | 第14-20页 |
| 1.3.1 SWEETs蛋白家族 | 第14-15页 |
| 1.3.2 SUTs蛋白家族的研究 | 第15-20页 |
| 1.4 植物细胞蔗糖含量和环境胁迫的关系 | 第20-21页 |
| 1.5 高山离子芥环境适应机制的研究 | 第21页 |
| 1.6 本研究的目的和意义 | 第21-22页 |
| 第二部分 实验材料与方法 | 第22-33页 |
| 2.1 RACE法获取CB7399基因cDNA序列全长 | 第22-23页 |
| 2.1.1 实验材料 | 第22页 |
| 2.1.2 方法及步骤 | 第22-23页 |
| 2.2 CB7399基因的克隆与载体构建 | 第23-26页 |
| 2.2.1 实验材料 | 第23-24页 |
| 2.2.2 CB7399基因的克隆方法及步骤 | 第24-26页 |
| 2.3 目的载体连接体系转化农杆菌及检验 | 第26页 |
| 2.4 转染拟南芥并获取纯合体种子 | 第26-27页 |
| 2.5 ATSUT4的克隆与载体构建 | 第27-28页 |
| 2.5.1 实验材料 | 第27页 |
| 2.5.2 克隆过程和载体的构建 | 第27-28页 |
| 2.6 目的载体连接体系转化农杆菌及检验 | 第28页 |
| 2.7 转染拟南芥并获取纯合体种子 | 第28页 |
| 2.8 RT-PCR检测不同Line的目的基因表达情况 | 第28-30页 |
| 2.8.1 实验材料 | 第28-29页 |
| 2.8.2 实验方法 | 第29-30页 |
| 2.9 CB7399和AtSUT4低温胁迫表达量检测 | 第30页 |
| 2.9.1 实验材料 | 第30页 |
| 2.9.2 实验方法 | 第30页 |
| 2.10 共聚焦荧光显微镜观察基因亚细胞定位 | 第30页 |
| 2.10.1 实验材料及器材 | 第30页 |
| 2.10.2 方法和步骤 | 第30页 |
| 2.11 糖含量的测定 | 第30-31页 |
| 2.11.1 主要器材及试剂 | 第30-31页 |
| 2.11.2 植物可溶性糖的提取 | 第31页 |
| 2.11.3 蔗糖含量的测定 | 第31页 |
| 2.11.4 果糖含量的测定 | 第31页 |
| 2.12 盐胁迫种子萌发率以及根长实验方法 | 第31-32页 |
| 2.12.1 实验材料及试剂 | 第31页 |
| 2.12.2 实验方法 | 第31-32页 |
| 2.13 LT50的测定 | 第32页 |
| 2.13.1 主要器材及试剂 | 第32页 |
| 2.13.2 实验方法及步骤 | 第32页 |
| 2.14 暗培养幼苗以及表型观察植株的培养方法 | 第32-33页 |
| 2.14.1 暗培养处理幼苗实验方法 | 第32页 |
| 2.14.2 表型观察植株方法 | 第32-33页 |
| 第三部分 实验结果 | 第33-63页 |
| 3.1 CB7399基因5'RACE实验结果 | 第33-34页 |
| 3.1.1 CB7399基因5'RACE克隆及菌液PCR检测电泳图 | 第33页 |
| 3.1.2 CB7399基因5'RACE测序结果 | 第33-34页 |
| 3.2 CB7399基因3'RACE实验结果 | 第34-36页 |
| 3.2.1 CB7399基因3’RACE克隆及菌液PCR检测电泳图 | 第34-35页 |
| 3.2.2 CB7399基因3'RACE测序结果 | 第35-36页 |
| 3.3 生物信息学分析CB7399基因序列 | 第36-41页 |
| 3.3.1 获取CB7399基因cDNA全长序列 | 第36页 |
| 3.3.2 分析CB7399基因与拟南芥SUTs同源情况 | 第36-37页 |
| 3.3.3. CB7399与拟南芥同源基因AtSUC4/AtSUT4氨基酸序列比对与跨膜结构域分析 | 第37-38页 |
| 3.3.4 CB7399基因与AtSUC4/AtSUT4氨基酸序列信号肽位置预测 | 第38-40页 |
| 3.3.5 CB7399与AtSUC4/AtSUT4基因氨基酸二级结构预测 | 第40-41页 |
| 3.4 CB7399超表达载体构建 | 第41-45页 |
| 3.4.1 CB7399入门克隆构建 | 第41-42页 |
| 3.4.2 CB7399目的克隆构建 | 第42-43页 |
| 3.4.3 CB7399三个表达载体连接体系转入根癌农杆菌GV3101菌液PCR验证 | 第43-45页 |
| 3.5 CB7399超表达T1代植株的筛选 | 第45页 |
| 3.6 AtSUT4超表达载体的构建 | 第45-48页 |
| 3.6.1 AtSUT4入门克隆的构建 | 第45-46页 |
| 3.6.2 AtSUT4目的克隆的构建 | 第46-47页 |
| 3.6.3 AtSUT4两个表达载体连接体系转入根癌农杆菌GV3101菌液PCR验证 | 第47-48页 |
| 3.7 AtSUT4超表达T1代植株的筛选 | 第48-49页 |
| 3.8 RT-PCR检测转基因植株表达量 | 第49-50页 |
| 3.8.1 pEarlygate104-CB7399超表达纯合体不同Line的表达量分析 | 第49页 |
| 3.8.2 RT-PCR检测pEarlygate100-CB7399转基因植株表达量 | 第49-50页 |
| 3.8.3 RT-PCR检测pEarlygate100-AtSUT4转基因植株表达量 | 第50页 |
| 3.9 CB7399、AtSUT4超表达转基因植株亚细胞定位观察 | 第50-51页 |
| 3.10 pEarlygate104-CB7399、pEarlygate100-CB7399转基因植株引起拟南芥叶片糖含量的变化 | 第51-52页 |
| 3.11 pEarlygate100-AtSUT4转基因植株糖含量变化 | 第52-53页 |
| 3.12 CB7399基因与AtSUC4/AtSUT4冷胁迫分析 | 第53-54页 |
| 3.13 pEarlygate104-CB7399、pEarlygate100-CB7399转基因植株叶片冷处理电导率结果 | 第54-56页 |
| 3.13.1 pEarlygate104-CB7399、pEarlygate100-CB7399转基因植株叶片非冷驯化(NCA)冷处理电导率结果 | 第54-55页 |
| 3.13.2 pEarlygate104-CB7399、pEarlygate100-CB7399转基因植株叶片冷驯化(CA)条件下冷处理电导率结果 | 第55-56页 |
| 3.14 pEarlygate100-AtSUT4转基因植株叶片冷处理电导率结果 | 第56-58页 |
| 3.15 pEarlygate104-CB7399转基因植株引起拟南芥盐胁迫响应 | 第58-61页 |
| 3.15.1 含1%蔗糖的1/2MS培养基上盐胁迫响应 | 第58-59页 |
| 3.15.2 无蔗糖的1/2MS培养基上盐胁迫响应 | 第59-60页 |
| 3.15.3 盐胁迫条件下转基因植株的根长变化 | 第60-61页 |
| 3.16 pEarlygate100-CB7399、pEarlygate100-AtSUT4转基因暗培养下胚轴和根伸长情况 | 第61-62页 |
| 3.17 pEarlygate100-CB7399、pEarlygate100-AtSUT4转基因植株表型变化 | 第62-63页 |
| 第四部分 讨论 | 第63-67页 |
| 4.1 CB7399基因的克隆和生物信息学分析 | 第63页 |
| 4.2 CB7399基因编码的蛋白质亚细胞定位 | 第63-64页 |
| 4.3 超表达CB7399基因引起了拟南芥糖含量的变化 | 第64-65页 |
| 4.4 植物冷的耐受性与可溶性糖的关系 | 第65页 |
| 4.5 CB7399超表达拟南芥能提高植株耐盐性 | 第65-67页 |
| 第五部分 结论 | 第67-68页 |
| 参考文献 | 第68-77页 |
| 致谢 | 第77页 |
